NADPH氧化酶(NAO)活性检测试剂盒 微板法

产品简介：

NADPH氧化酶（NAO）是一个典型的膜蛋白，催化NADPH氧化生成NADP+，并将电子传递给氧原 子从而产生超氧阴离子。广泛存在于动物、植物和真菌中。该酶异常可导致人慢性肉芽肿病（GCD），在植物中，该酶与其抗病性和各种胁迫有密切关系。

NADPH氧化酶（NAO）将NADPH氧化为NADP+的同时生成超氧阴离子(O2.-)，接着与显色剂反应 生成水溶性的黄色物质。对照通过添加该酶的特异性抑制剂DPI排除背景值。最终检测生成的有色物质在 450nm 处的吸光值，即可计算得出NAO酶活性大小。

保存条件: 

-20℃保存，六个月有效。

产品组成：

产品使用：

建议正式实验前，选取 2 个样本做预测定，了解实验样品情况，熟悉流程，避免样本和试剂浪费！

一、样本准备：

(a) 组织样本：取约0.1g组织，加入1mL提取液，在4ºC或冰浴进行匀浆(或使用各类常见匀浆器)。 4ºC×12000rpm 离心10min，取上清作为待测液；

【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例进行提取。 (b) 细菌/细胞样本：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细菌或细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000rpm 4℃离 心10min，取上清，置冰上待测。

【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（10⁴）：提取液（mL）为500~1000：1的比例进行提取。

(c) 液体样品：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。

二、上机检测：

(a) 酶标仪预热30min以上，设定温度37℃，调节波长至450nm。

(b) 所有试剂解冻至室温（25℃）。

(c) 在96孔板中依次加入：

【注】若ΔA的值在零附近，可以延长反应时间T（如至40min或更长），则改变后的反应时间T需代入公式重新计算。

三、含量计算:

1、按样本蛋白浓度计算：

酶活定义：每毫克组织蛋白每分钟在反应体系中使450nm处吸光值变化0.01为一酶活单位。

NAO(ΔOD₄₅₀/min/mg prot)=ΔA÷(V1×Cpr)÷0.01÷T=250×ΔA÷Cpr

2、按样本鲜重计算：

酶活定义：每克组织每分钟在反应体系中使450nm处吸光值变化0.01为一酶活单位。

NAO(ΔOD₄₅₀/min/g 鲜重)=ΔA÷(W×V1÷V)÷0.01÷T=250×ΔA÷W

3、按细菌或细胞密度计算：

酶活定义：每1万个细菌或细胞每分钟在反应体系中使450nm处吸光值变化0.01为一酶活单位。

NAO(ΔOD₄₅₀/min /10⁴ cell)=ΔA÷(500×V1÷V)÷0.01÷T=0.5×ΔA

V---加入提取液体积，1mL

V1---加入样本体积，0.02mL

T---反应时间，20min

W---样本质量，g

500---细胞或细菌，万

D---稀释倍数，未稀释即为1

Cpr---样本蛋白质浓度，mg/mL

注意事项：

1.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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