SgrAI

产品简介：

SgrAI来源于灰色链霉菌（Streptomyces griseus），经大肠杆菌重组表达后纯化获得，特异性识别并切割CR/CCGGYG序列。SgrAI属于非LightNing®系列限制酶，但可兼容CutOne®缓冲液，可用于和其他LightNing®系列限制酶进行双酶切。基于酶的特殊性，SgrAI需要两个及以上的酶切位点才能实现高效切割，对单位点的底物切割效率显著下降。

识别位点：

CRCCGGYG
5'...C R ↓ C C G G Y G...3'
3'...G Y G G C C ↑ R C...5'

产品组成：

保存条件: 

-20℃保存，2年有效。

建议反应条件：

1× Cut Buffer B；

37℃温育；
参照“DNA 酶切流程”配制反应体系。

失活条件：

80℃温育20 min。

甲基化敏感性:

对于被 CpG 甲基化的 DNA，剪切可能受阻。

对于被 EcoKI 甲基化的 DNA，剪切可能受阻。

对于被 EcoBI 甲基化的 DNA，剪切可能受阻。

活性定义:

1活性单位 (U) 是指在激活剂存在下，50 μl反应体系中，37℃ 1 h 内完全酶切1 µg λDNA 所需的酶量。

功能活性检测：

37℃下，10 U SgrAI能够在15 min内完全消化1 μg λDNA。

超长时间温育检测：

37℃下，将10 U SgrAI与1 μg λDNA共同温育3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。延时酶切可能出现星号活性。

酶切-连接-再酶切检测：

37℃下，使用10 U SgrAI消化底物，回收酶切产物。在22℃下使用适量 T4 DNA Ligase (Fast)可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

使用方法：

1. DNA酶切流程

① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

a. DNA 底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响SgrAI酶活性；

② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

③ 37℃温育15 min~1 h；

④ 80℃温育20 min即可使酶失活，停止反应，或者通过吸附柱或苯酚/氯仿纯化终止反应。

不同DNA中的酶切位点数量

甲基化修饰影响

在不同反应缓冲液中的活性

注：活性数据来自限制酶标准反应体系下的检测。

注意事项：

1.      酶切需要两个或两个以上识别位点。

2.      每μg DNA底物使用的酶量不建议超过10 U。

3.      因为反应中酶的稳定性，即使温育时间超过1 h也不会提高酶切效率，除非增加酶量。

4.      延长酶切时间、高浓度酶或>5%的甘油浓度可能产生星号活性，尤其不建议过夜酶切。

5.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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