BsrDI

产品简介：

BsrDI来源于Bacillus stearothermophilus D70，由大小两个亚基组成，属于异二聚体酶。BsrDI识别特定序列GCAATG/CATTGC，切割顶链时在识别位点下游2个核苷酸处，底链则在识别位点后直接切割，产生特定的黏性末端，属于Type IIS 型限制酶，可用于Golden gate组装。

识别位点：

GCAATGNN
5'...G C A A T G N N ↓...3'
3'...C G T T A C↑N N ...5'

同裂酶：Bse3DI, BseMI

注：同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。

产品组成：

保存条件: 

-20℃保存，2年有效。

建议反应条件：

1× Cut Buffer B；
37℃温育；
参照“DNA 酶切流程”配制反应体系。

失活条件：

80℃温育20 min。

甲基化敏感性:

对于被 EcoBI 甲基化的 DNA，剪切可能受阻。

活性定义:

1活性单位 (U) 是指在激活剂存在下，50 μl反应体系中，37℃ 1 h 内完全酶切1 µg λDNA 所需的酶量。

功能活性检测：

37℃下，10 U BsrDI能够在15 min内完全消化1 μg λDNA。

超长时间温育检测：

37℃下，将10 U BsrDI与1 μg λDNA共同温育3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。延时酶切可能出现星号活性。

酶切-连接-再酶切检测：

37℃下，使用10 U BsrDI消化底物，回收酶切产物。在22℃下使用适量 T4 DNA Ligase (Fast)可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

使用方法：

1. DNA酶切流程

① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

a. DNA 底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响BsrDI酶活性；

② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

③ 37℃温育15 min~1 h；

④ 80℃温育20 min即可使酶失活，停止反应，或者通过吸附柱或苯酚/氯仿纯化终止反应。

不同DNA中的酶切位点数量

甲基化修饰影响

在不同反应缓冲液中的活性

注：活性数据来自限制酶标准反应体系下的检测。

注意事项：

1.      反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的10%，避免酶中过多的甘油引起星号活性；

2.      限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂(例如甘油、盐)与底物溶液中的污染物(例如盐、EDTA或乙醇等)相同，反应体积越小，酶切反应抑制效应越强。

3.      BsrDI可在CutOne Buffer中使用，但星号活性明显强于在Cut Buffer B中反应。若要使用Cutone Buffer进行反应，不建议酶切时间超过3 h或者超过 2 U的 BsrDI/µg DNA 底物。

4.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关常规限制性内切酶产品：