BbvCI

产品简介：

BbvCI来源于短芽孢杆菌(Bacillus brevis) (L. Ge)的BbvCI基因，经大肠杆菌重组表达获得。BbvCI属于Type IIA 类限制酶，以异源二聚体形式存在，由两个不同的催化亚基构成，每个亚基具有独立的切割位点。BbvCI识别并切割非回文序列CCTCAGC(-5/-2)，形成5'端3碱基突出的粘性末端。BbvCI使用Cutone®反应缓冲液，可与其他LightNing®系列限制酶进行双酶切，但不建议长时间酶切（超过3 h），以避免产生星号活性。

识别位点：

CCTCAGC
5'...C C↓T C A G C...3'
3'...G G A G T↑C G ...5'

产品组成：

保存条件: 

-20℃保存，2年有效。

建议反应条件：

1× CutOne® Buffer；

37℃温育；

参照“DNA酶切流程”配制反应体系。

失活条件：

80℃温育20 min。

甲基化敏感性:

对于被 CpG 甲基化的 DNA，剪切可能受阻。

活性定义:

1活性单位 (U) 是指在激活剂存在下，50 μl反应体系中，37℃ 1 h 内完全酶切1 µg λDNA 所需的酶量。

功能活性检测：

37℃下，2 U BbvCI能够在15 min内完全消化1 μg λDNA。

超长时间温育检测：

37℃下，将2 U BbvCI与1 μg λDNA共同温育3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。延时酶切可能出现星号活性。

酶切-连接-再酶切检测：

37℃下，使用2 U BbvCI消化底物，回收酶切产物。在22℃下使用适量 T4 DNA Ligase (Fast)可以将＜10%的酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开95%以上连接产物。

使用方法：

1. DNA酶切流程

① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

a. DNA 底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响BbvCI酶活性；

② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

③ 37℃温育1~3 h；

④ 80℃温育20 min即可使酶失活，停止反应，或者通过吸附柱或苯酚/氯仿纯化终止反应。

不同DNA中的酶切位点数量

甲基化修饰影响

在不同反应缓冲液中的活性

注：活性数据来自限制酶标准反应体系下的检测。

注意事项：

1.      反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的10%，避免酶中过多的甘油引起星号活性；

2.      限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂（例如甘油、盐）与底物溶液中的污染物（例如盐、EDTA或乙醇等）相同，反应体积越小，酶切反应抑制效应越强;

3.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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