ApeKI

产品简介：

ApeKI来源于超嗜热需氧古生菌(Aeropyrum pernix) K1，属于Type IIP型限制酶，识别并切割G/CWGC序列，形成3碱基突出的粘性末端。ApeKI是基因组简化测序（genotyping-by-sequencing，GBS）的首选酶之一，此外，还广泛应用于动植物遗传研究、群体进化分析及功能基因定位等领域。

识别位点：

GCWGC
5'...G↓C W G C...3'
3'...C G W C↑G ...5'

同裂酶：TseI

注：同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。

产品组成：

保存条件: 

-20℃保存，2年有效。

建议反应条件:

1× Cut Buffer C；
75℃温育；
参照“DNA 酶切流程”配制反应体系。

失活条件:

不可热失活，请使用酚氯仿抽提或柱纯化。

甲基化敏感性:

对于被 CpG 甲基化的 DNA，剪切可能受阻。

活性定义:

1 活性单位 (U) 是指在 50 μl 反应体系中，75℃ 1 h内完全酶切 1 μg λDNA 所需的酶量。

功能活性检测：

75℃下，10 U ApeKI能够在15 min内完全消化1 μg λDNA。

超长时间温育检测:

75℃下，将10 U ApeKI与1 μg λDNA共同温育3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。延时酶切可能出现星号活性。

酶切-连接-再酶切检测:

75 ℃下，使用10 U ApeKI消化底物，回收酶切产物。在22℃下使用适量 T4 DNA Ligase (Fast)可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

使用方法：

1. DNA酶切流程

① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

a. DNA 底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响ApeKI酶活性；

② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

③ 75℃温育15 min~3 h；

④ 酚氯仿抽提或柱纯化（可选）。

不同DNA中的酶切位点数量

甲基化修饰影响

在不同反应缓冲液中的活性

注：活性数据来自限制酶标准反应体系下的检测。

注意事项：

1.      反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的10%，避免酶中过多的甘油引起星号活性；

2.      限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂（例如甘油、盐）与底物溶液中的污染物（例如盐、EDTA或乙醇等）相同，反应体积越小，酶切反应抑制效应越强。

3.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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