Sgel

产品简介：

SgeI可切割在单链或双链 DNA 上含有5-甲基胞嘧啶的 DNA 靶标。SgeI 限制性内切酶可识别 ᵐ⁵CNNG(9/13)^ 位点，并于37°C下在其独特的缓冲液中的切割效果最佳。为确保一致的性能，该酶Storage Buffer中包含预混合 BSA，其可增强酶的稳定性，并与 DNA 制剂中可能存在的污染物相结合。

识别位点：

ᵐ⁵CNNG(9/13)
5'...ᵐ⁵ C N N G(N)₉ ↓...3'
3'... G N N C(N)₁₃ ↑...5'*
*SgeI 可识别与切割含有5-mC位点的DNA靶标序列，一条链或双链甲基化均可被识别。

产品组成：

保存条件: 

-20℃保存，2年有效。

建议反应条件：

1× Sgel缓冲液；
37℃温育；
参照“DNA 酶切流程”配制反应体系。

失活条件：

80℃温育20 min。

甲基化敏感性:

对于被 CpG 甲基化的 DNA，剪切可能受阻。

活性定义:

在1× SgeI Buffer条件下，1 μg pUC19-SgeI DNA (Dcm+)在50 μl反应体系中37℃孵育1 h，不断增加酶量，直至酶切产物 DNA带 型不随着酶量的增加而发生变化，此时酶量定义为 1 U。

核酸内切酶残留检测：

将3 U Sgel与超螺旋质粒DNA 在37℃温育4 h，通过DNA电泳检测质粒无变化。

功能活性检测：

37℃下，5 U AarI能够在1 h 内完全消化1 µg p615 DNA。

核酸外切酶残留检测：

将5 U Sgel与双链DNA 底物在37℃温育1 h，通过DNA电泳检测双链DNA底物无变化。

使用方法：

1. DNA酶切流程

① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

注：反应体系可以按比例放大或缩小。反应时间不建议超过1 h。

② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

③ 37℃温育1 h；

④ 80℃温育20 min即可使酶失活，停止反应（可选）。

甲基化修饰影响

注意事项：

1.      底物至少需要2个SgeI识别序列才能有效酶切。

2.      甲基化DNA完全酶切取决于SgeI的识别位点的数量，另外由于识别位点酶切产生的DNA产物会促进SgeI的非特异性酶切，因此建议酶切时优化SgeI酶量用于酶切反应。

3.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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