AarI

产品简介：

AarI属于Type IIS型限制酶，是PaqCI的完全同裂酶，识别CACCTGC序列并在其下游进行切割，形成4碱基的5'突出。不同于常规的Type IIS限制酶，AarI酶切需要两个或两个以上识别位点，搭配随酶附赠的激活剂可实现完全酶切，在没有激活剂的情况下可以酶切，但无法酶切完全。AarI的识别序列长达7碱基，在基因中的出现频率较低，尤其适合用于Golden Gate组装。

识别位点：

CACCTGC(4/8)
5'...C A C C T G C (N)₄↓...3'
3'...G T G G A C G (N)₈↑...5'

同裂酶：PaqCI

注：同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。

产品组成：

保存条件: 

-20℃保存，2年有效。

建议反应条件：

1× CutOne® 缓冲液；

37℃温育；

参照“DNA酶切流程”配制反应体系。

失活条件：

80℃温育20 min。

甲基化敏感性:

对于被 CpG 甲基化的 DNA，剪切可能受阻。

活性定义:

1活性单位 (U) 是指在激活剂存在下，50 μl反应体系中，37℃ 1 h 内完全酶切1 µg λDNA 所需的酶量。

功能活性检测：

37℃下，5 U AarI能够在1 h 内完全消化1 µg p615 DNA。

超长时间温育检测：

37℃下，将5 U AarI与1 μg p615 DNA共同温育3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。延时酶切可能出现星号活性。

酶切-连接-再酶切检测：

37℃下，使用5 U AarI消化底物，回收酶切产物。在22℃下使用适量 T4 DNA Ligase (Fast)可以将超过95%酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开约95%以上的连接产物。

使用方法：

1. DNA酶切流程

① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

a. DNA底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响AarI酶活性；

b. AarI完全酶切需要按1:1的比例加入和酶体积一致的激活剂，激活剂在电泳时表现为几十bp左右的条带，请避免误判为非特异性切割。

② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

③ 37℃温育1~3 h；

④ 80℃温育20 min即可使酶失活，停止反应，或者通过吸附柱或苯酚/氯仿纯化终止反应。

不同DNA中的酶切位点数量

甲基化修饰影响

在不同反应缓冲液中的活性

注：活性数据来自限制酶标准反应体系下的检测。

注意事项：

1.      AarI是PaqCI的完全同裂酶；

2.      AarI完全酶切需要两个或两个以上识别位点；

3.      反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的10%，避免酶中过多的甘油引起星号活性；

4.      限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂（例如甘油、盐）与底物溶液中的污染物（例如盐、EDTA或乙醇等）相同，反应体积越小，酶切反应抑制效应越强;

5.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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