BsmBI

产品简介：

BsmBI属于Type IIs型限制酶，可识别非回文序列，并在识别序列之外进行切割，常用于 Golden Gate 组装。经过优化的反应 Buffer 使 BsmBI 最大限度发挥功能，同时反应缓冲液包含重组白蛋白，其可增强多种酶的稳定性。

识别位点：

CGTCTC(1/5)
5'...C G T C T C (N)₁↓...3'
3'...G C A G A G (N)₅↑...5'

同裂酶：Esp3I

注：同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。

产品组成：

保存条件: 

-20℃保存，2年有效。

建议反应条件：

1× Cut Buffer C；
55℃温育；
参照“DNA 酶切流程”配制反应体系。

失活条件：

80℃温育20 min。

甲基化敏感性:

对于被 CpG 甲基化的 DNA，剪切可能受阻；

对于被 EcoBI 甲基化的 DNA，剪切可能受阻

活性定义:

1 活性单位 (U) 是指在 50 μl 反应体系中，55℃ 1 h内完全酶切 1 µg λDNA 所需的酶量。

超长时间温育检测：

最适反应温度下，将10 U BsmBI与1 μg λDNA共同温育3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，延时酶切可能出现星号活性。

酶切-连接-再酶切检测：

最适反应温度下，使用10 U BsmBI消化底物，回收酶切产物。在22℃下使用适量 T4 DNA Ligase (Fast)可以将酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

DNase 残留检测：

将10 U BsmBI与双链 DNA 底物在 37℃温育 16 h，通过 DNA 电泳检测双链DNA 底物无变化。

使用方法：

1. DNA酶切流程

① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

a. DNA 底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响BsmBI酶活性；

② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

③ 55℃温育15 min~1 h，一般推荐5 U~10 U酶/μg 质粒DNA、10 U~20 U酶/μg 基因组DNA，温浴1 h，如需过夜酶切反应，请将酶量调整至1 U；

④ 80℃温育20 min即可使酶失活，停止反应，或者通过吸附柱或苯酚/氯仿纯化终止反应。

小体积推荐加样体系：

b. 为避免蒸发，10 μl反应体系的孵育时间不应超过1 h。

不同DNA中的酶切位点数量

甲基化修饰影响

注意事项：

1.      反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的10%，避免酶中过多的甘油引起星号活性；

2.      限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂（例如甘油、盐）与底物溶液中的污染物（例如盐、EDTA或乙醇等）相同，反应体积越小，酶切反应抑制效应越强;

3.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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