尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏微板法)

产品简介：

尿素(Urea)又称碳酰胺(carbamide)，是哺乳动物和某些鱼类体内蛋白质代谢分解的主要含氮终产物，也是目前含氮量最高的氮肥；尿素检测方法大致分为化学方法和酶学方法，后者被认为是间接方法，先经尿素酶(脲酶)分解尿素为铵离子，然后根据波氏反应检测铵离子的生成量。

尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏微板法)检测原理是尿素酶水解尿素，产生氨和二氧化碳，氨在碱性条件下与苯酚等反应生成蓝色吲哚酚，吲哚酚的生成量与尿素含量呈正比，通过酶标仪测定560nm处吸光度，该试剂盒可用于测定人体、动物的血浆、血清、尿液等样品中尿素(旧称尿素氮，BUN)含量，但尿液最好经过处理后再行检测。

保存条件: 

-20℃避光保存，6个月有效。

产品组成：

自备材料：

水浴锅或恒温箱、离心管或小试管、酶标仪、96 孔板、无氨蒸馏水、沸石

产品使用：（仅供参考）

1、准备样品：

①血浆、血清：血浆、血清按照常规方法制备，直接用于该试剂盒的测定，-20℃冻存。

②尿液：尿液样品最好处理后测定，方法如下：取0 .6 ml尿液样品，加入沸石0 .3g，加入无氨蒸馏水至15ml，反复震荡数次，吸附尿液中的游离铵盐，静置后，吸取稀释尿液，所测结果乘以25，如果尿液比较少，可以等比例减少各试剂的使用量。如果取1ml尿液样品，应加入沸石0 .5g，加入无氨蒸馏水至25ml，反复震荡数次，吸附尿液中的游离铵盐，静置后，吸取稀释尿液，所测结果乘以25。

2、配制标准品工作液：

取适量的尿素标准(100mmol/L)，按尿素标准(100mmol/L)：ddH₂O =1:19的比例混合，使尿素浓度达到5 mmol/L，即为标准品工作液-尿素标准(5mmol/L)；4℃保存，1 周有效。

3、配制脲酶工作液：

取适量的脲酶溶液，按脲酶溶液：脲酶稀释液=1:99 的比例混合，即为脲酶工作液；4℃避光保存，1 月有效。

4、Urea 加样：

按照下表设置空白孔、标准孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的Urea 浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

5、Urea 测定：

充分混匀，37℃水浴20min，酶标仪测定560nm处吸光度，空白孔调零，读取各孔吸光度，分别为A_标准、A_测定。

 6、计算：

尿素(mmol/L)=(A_测定/A_标准)×5 mmol/L

式中：A_测定=测定孔的吸光度

A_标准=标准孔的吸光度

参考区间：

成年人血清尿素：2.9~8.2mmol/L

注意事项：

1.      本实验可测定560和630nm处的吸光度。

2.      如果没有酶标仪，也可用分光光度计测定，但应注意加入试剂量不同，相应的检测次数会大大减少。

3.      避免使用铵盐抗凝剂，否则会使结果偏高。

4.      高浓度氟化物可抑制尿素酶，引起结果假性偏低。

5.      采用酶标仪未调零情况下，空白管OD值一般在0 .05 ~0.15之间，5 mmol/L 标准管参考范围一般在0 .15 ~0.40之间。

6.      以肉眼观察，一般情况下尿素浓度≤1 mmol/L可显淡绿色或淡蓝色，浓度≥2mmol/L即可显蓝色，浓度≥15mmol/L即可显深蓝色，一般情况下接近上限比接近下限更准确。

7.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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