植物总糖和还原糖检测试剂盒(DNS微板法)

产品简介：

植物体内的碳素营养状况以及农产品的品质形状，常以糖含量作为重要指标，单糖和某些寡糖(如麦芽糖)含有游离的醛基或酮基，具有还原性，属于还原糖；多糖和蔗糖等属于非还原糖，可以利用非还原糖能被酸水解为单糖的特性通过测定水解后的单糖含量对总糖进行测定。

植物总糖和还原糖检测试剂盒(DNS微板法)检测原理是还原糖在碱性加热条件下被氧化成糖酸，3,5-二硝基水杨酸被还原为棕红色的氨基化合物，在一定范围内还原糖的量与棕红色产物的颜色深浅程度呈一定比例关系，在540nm处用酶标仪测定棕红色物质的吸光度，该吸光度值与还原糖含量呈线性关系，利用标准曲线计算样品中的还原糖和总糖的含量。

保存条件: 

2-8℃避光保存，1年有效。

产品组成：

自备材料：

1.      蒸馏水、盐酸溶液、氢氧化钠溶液

2.      50ml 离心管、1 ml离心管、离心机、水浴锅或恒温箱、酶标仪、96 孔板、水浴锅

产品使用：（仅供参考）

1、还原糖的提取：

① 称取植物样品0 .5 ~3g，剪碎，加入蒸馏水约3ml匀浆，转移至烧杯或三角瓶中，用12ml 蒸馏水冲洗研磨器2 ~3次，洗出液也转移至该容器。

② 50℃水浴30min，并不时搅拌，以便还原糖彻底浸出。

③ 将沉淀和浸出液转移至50ml离心管，4000g离心5 min。

④ 留取上清液，向沉淀中加入20ml蒸馏水，混匀，再次4000g离心5 min。

⑤ 留取上清液，将2 次获得的上清液合并，用蒸馏水定容至100ml (提取液)，混匀，作为还原糖待测液。

2、总糖的水解和提取：

① 称取植物样品0 .5 ~3g，剪碎，加入蒸馏水约3ml匀浆，转移至烧杯或三角瓶中，用12ml 蒸馏水冲洗研磨器2 ~3 次，洗出液也转移至该容器。

② 向容器中加入10ml 6 M盐酸溶液，搅拌均匀，然后置于沸水浴中加热水解30min，并不时搅拌。

③ 取2滴滴加于载玻片上，滴加1 滴显色液(约50μl)，检查水解是否完全，如已经水解完全，则不显示蓝色。

④ 水解完毕后，冷却至室温，加入6M氢氧化钠溶液，使溶液pH至7.4，用蒸馏水定容至100ml，混匀，4000g离心5min或过滤。

⑤ 取上清或滤液10ml，用蒸馏水定容至100ml，成稀释10倍的总糖水解液(提取液)，取50μl总糖水解液，测定其还原糖的含量。

3、稀释葡萄糖标准：

取干净离心管或试管，按下表操作，依次获得系列浓度的Glu标准。

4、加样：

取1ml 离心管，按照下表设置空白孔、标准孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡，小心混匀；如果样品中的糖浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置2 ~3平行孔，求平均值。

5、还原糖测定：

混匀，依次抽取300μl转移至相应96孔板中，以空白孔调零，测定540nm处标准孔、测定孔的吸光度。

6、计算：

以系列Glu 标准(1 ~5 号)，即标准葡萄糖浓度(mg/ml)为横坐标，以相应的吸光度为纵坐标，作图得标准曲线，根据提取液的吸光度在标准曲线上查出相应的葡萄糖浓度。

还原糖的百分含量：

100g样品中还原糖含量(g)=(c×V_T)/(m×1000)×100 =(c×V_T)/(m×10)

总糖的百分含量：

100g样品中总糖含量(g)=(c×N×V_T)/(m×1000)×100×0.9=(c×N×V_T)/(m×10)×0.9

式中：

c=从标准曲线查的糖量(mg/ml)

V_T=提取液的总体积(ml)=100

m=植物样品的质量(g)

N=总糖水解液的稀释倍数=10

注意事项：

1.      上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。

2.      待测样品如不能及时测定，应置于2 ~8℃保存，3天内稳定。

3.      如果样品还原糖浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。

4.      总糖计算公式在测定干扰杂质很少、还原糖含量相对总糖含量很少时使用，×0.9 是为了从测定出的总糖水解成单糖中，扣除水解时所消耗的水量。

5.      6 M盐酸配制：一般市售的浓盐酸为11.6 ~12M，用蒸馏水或去离子水与浓盐酸1：1混合即配制成6 M，盐酸溶于水会放热，应小心操作，避免伤人。

6.      6M氢氧化钠配制：氢氧化钠24g溶解于蒸馏水或去离子水，补至100ml，氢氧化钠溶于水会放热，应小心操作，避免伤人。

7.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

附录1：标准曲线制作：按说明书操作，通过分光光度计对系列标准进行吸光度的测定，其数值及标准曲线如下(仅供参考)：

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