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  • Indo-1五钾盐是一种细胞非渗透性的发射比率型钙离子荧光探针,Kd约230nM。与钙结合后其最大发射波长由约475至485nm蓝移至约400至410nm,可在单一紫外激发下同时检测两个发射波长,通过比值定量胞内钙,减少探针装载不均、渗漏和细胞厚度差异带来的误差。相比需要切换激发波长的Fura-2,Indo-1更适合流式细胞仪和多色荧光实验,常用氩离子激光351至364nm激发。该探针不具细胞膜渗透性,需通过显微注射或膜片钳导入细胞,若需免注射加载可选择膜渗透性的Indo-1 AM。
  • Quin-2 AM是Quin-2的乙酰氧基甲酯形式,具细胞膜渗透性,可扩散进入细胞并被胞内酯酶水解释放出Quin-2保留在胞内,无需显微注射即可加载,适合活细胞钙成像。探针为高亲和力钙探针,Kd约115nM,适合监测静息细胞等低水平胞内钙,对钙选择性远高于镁,信号受钠离子、膜电位和胞内pH影响小,可进行双波长比率检测。加载时建议配合Pluronic F-127助溶,膜非渗透的Quin-2四钾盐(NBS7666)另可供货。
  • Quin-2四钾盐是一种膜非渗透性高亲和力钙离子荧光探针,Kd约115nM,适合监测静息细胞等低水平胞内钙。对钙选择性远高于镁,信号受钠离子和膜电位影响小,可通过双波长比率检测校正探针浓度与光路差异。不具细胞膜渗透性,需通过显微注射或划痕负载导入细胞,另提供膜渗透性的Quin-2 AM形式。
  • Rhod-2三钠盐是一种水溶性可见光激发的钙离子荧光探针,不具细胞膜渗透性,需通过显微注射或划痕标记等方式导入细胞。探针与钙结合后荧光显著增强,激发和发射光谱不随钙浓度明显迁移,属于单波长强度型,无法像Fura系列那样通过双波长比率校正探针浓度和光路差异,多样本比较时建议只看刺激前后的相对变化。其激发波长在罗丹明区域,可使用TRITC通道或543nm、561nm激光,适合存在自发荧光的样本,也便于与GFP等绿色荧光探针联用。有资料指出Rhod-2可依赖线粒体膜电位富集于线粒体,常用于线粒体钙监测,但内质网等高钙区室容易使高亲和力探针饱和,选型需谨慎。
  • Rhod-2 Tripotassium Salt(货号NBS7664)是水溶性高亲和力的可见光激发钙离子荧光探针,为Rhod-2的三钾盐形式,不具有细胞膜渗透性,可通过微注射或划痕标记等方式直接加载进入细胞。该探针激发和发射光谱不随Ca2+浓度变化发生明显迁移,与Ca2+结合后荧光信号显著增强(Ex/Em=549/578 nm),钙亲和力较高(Kd约570nM),光谱特性类似于Fluo-3或Fluo-4,适用于活细胞钙成像研究。
  • Fura-2 Pentapotassium Salt(货号NBS7663)是经典钙离子探针Fura-2的五钾盐形式,为亲水性盐形式,不具有细胞膜渗透性,可通过微注射、膜片钳、划痕标记等方法直接加载进入细胞。该探针属于紫外激发比率型钙离子荧光探针,Ca2+自由态Ex/Em为363/512 nm,饱和态为335/505 nm,结合钙离子后最大激发波长发生蓝色迁移,发射波长基本不变。其钙亲和力较高(Kd约145 nM),通过340/380 nm双波长激发比值检测可有效消除探针浓度、细胞厚度及光路差异带来的误差,自1985年合成以来广泛应用于各类细胞系统及生化体系的胞内钙离子动态监测与数字显微成像研究。
  • Fura-FF AM(货号NBS7662)是基于Fura-2结构开发的二氟化衍生物钙离子荧光探针,与Fura-2相比,其对镁离子(Mg2+)基本不敏感,有效消除了高镁环境下探针信号的假阳性干扰。该探针钙亲和力较低(Kd约6μM),并呈现典型的比率型光谱位移特征(Ca2+自由态Ex/Em 365/514 nm,结合态339/507 nm),使其成为线粒体等细胞器内高浓度钙动态监测的理想工具,同时也适用于神经元树突和树突棘等低钙缓冲能力体系的钙信号研究。AM衍生物形式具有细胞膜渗透性,经简单培养即可负载入细胞,被胞内酯酶剪切后生成亲水性Fura-FF滞留胞内,适用于共聚焦显微镜、流式细胞仪及荧光酶标仪等多种检测平台。
  • Fura Red AM(货号NBS7661)是一种可见光激发的Fura-2类似物钙离子荧光探针,以乙酰甲酯衍生物形式提供,具有细胞膜渗透性,经简单培养即可负载入细胞,被胞内酯酶剪切后生成不具膜渗透性的Fura Red滞留在胞内。该探针支持比率法检测钙离子水平(Ca2+自由态Ex/Em 471/652 nm,结合态436/630 nm),可与Fluo-3 AM、Fluo-4 AM、Fluo-8 AM等绿色荧光探针同时加载进行多色标记,可见光激发相比传统紫外探针光毒性更小,亦可与荧光素类染料及蓝色荧光蛋白联用,适用于活细胞钙成像研究。
  • 与其它基于BAPTA结构的指示剂相比,Rhod-5N显示出更低的钙离子亲和力(Kd=~320 µM),适用于浓度在10µM~1mM的钙离子测定。与母本Rhod-2指示剂类似,Rhod-5N在不含二价阳离子的情况下基本无荧光,一旦与钙离子结合后,呈现出显著的荧光增加,光谱基本无迁移。低亲和钙离子指示剂特别适合于具高浓度钙离子的细胞区室研究,比如:内质网,在这种区室内高亲和探针对腔室钙水平变化不敏感。 Rhod-5N AM是Rhod-5N的一种乙酰甲酯衍生物,具有细胞膜渗透性,只需简单培养,即可轻易进入细胞。一旦进入细胞内,即被其内酯酶剪切生成不具膜渗透性的Rhod-5N,从而滞留在胞内以发挥相应生理功能。本品以冻干粉的形式提供,使用时只需经无水DMSO充分溶解,配置成2~5mM的储存液,并依据具体实验和相关文献资料调整到需要的工作浓度即可。
  • Fluo-5N是Fluo-4的结构类似物,具更低的钙结合亲和力,使其非常适用于钙水平在1µM~1mM区间内的胞内钙离子检测,而Fluo-3和Fluo-4在这个区间内的钙离子反应达到饱和。Fluo-5N与氩离子激光器的488nm激发光兼容,使其适用于共聚焦显微镜、流式细胞仪、荧光酶标仪等仪器。激发和发射波长分别是494和516nm。一旦与钙离子结合,荧光强度增加大于100倍,波长迁移非常少。 Fluo-5NAM是Fluo-5N的一种乙酰甲酯衍生物,具有细胞膜渗透性,只需简单培养,即可轻易进入细胞。