热稳定T7 RNA聚合酶

High T7 RNA Polymerase

产品简介：

  本产品是经基因工程改造的热稳定T7 RNA聚合酶，对噬菌体T7启动子序列具有高度特异性，跟野生型噬菌体 T7 RNA 聚合酶相比，它可在更高的温度下进行反应。High T7 RNA Polymerase可在 37~52℃条件下进行高效的体外转录。

产品组成：

保存条件: 

-20℃保存，2年有效。

适用范围：

1. 合成单链RNA，包括mRNA，siRNA，gRNA等各类RNA的前体。
2. 合成标记或未标记的高特异性RNA探针。 
3. 利用帽子类似物合成加帽的mRNA。

活性定义:

1 活性单位 (U) 是指在50℃ 1 h内使1 nmol ATP掺入酸不溶性 沉淀物所需要的酶量。

蛋白纯度检测：

使用SDS-PAGE凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于95%。

核酸内切酶活性检测：

将酶液与超螺旋质粒DNA在37℃ 温育4 h，通过 DNA 电泳检测质粒无变化。

DNase 活性检测:

将酶液与双链DNA底物在37℃温育16 h，通过DNA电泳检测双链 DNA 底物无变化。

RNase 活性检测：

将酶液与 RNA 在37℃温育1 h，通过电泳检测RNA无降解。

功能检测：

体外转录合成实验，通过 RNA 电泳可以检测到目的条带。

使用方法：

推荐反应体系（20 μl）

注1：建议加完Nuclease-Free Water，再加CTP / GTP/ ATP/ UTP。

注2：NTP用量影响转录产量，推荐的NTP用量下1 μg模板可获得约150~200 μg RNA，减少NTP用量会降低转录产量。

推荐反应条件：

50℃反应1 h。 反应结束后，可向上述20 μl反应液中加入1 μl dsDNase，37℃ 孵育15 min用于去除DNA模板。

注意事项：

1.      模板DNA的纯度对体外转录反应至关重要。质粒DNA抽提过程中引入的RNase A残留会显著影响转录RNA的质量，建议使用OD260/280为1.8~2.0的高纯度RNase-free质粒。

2.      模板DNA可通过线性化环状质粒或PCR获得。模板DNA上游需含有T7启动子序列，下游为平末端或编码链5'末端突出。

3.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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