BspQI 属于 Type IIS 型限制酶,识别非回文序列,并在识别序列之外进行切割,常用于 Golden Gate 组装。经过优化的反应Buffer使 BspQI 最大限度发挥功能,同时反应缓冲液包含重组白蛋白,其可增强多种酶的稳定性。
识别位点:
GCTCTTC(1/4)
5'...G C T C T T C (N)₁↓...3'
3'...C G A G A A G (N)₄↑...5'
同裂酶:SapI, LguI, PciSI
注:同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。
BsmBI属于Type IIs型限制酶,可识别非回文序列,并在识别序列之外进行切割,常用于 Golden Gate 组装。经过优化的反应 Buffer 使 BsmBI 最大限度发挥功能,同时反应缓冲液包含重组白蛋白,其可增强多种酶的稳定性。
识别位点:
CGTCTC(1/5)
5'...C G T C T C (N)₁↓...3'
3'...G C A G A G (N)₅↑...5'
同裂酶:Esp3I
注:同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。
BsiWI 属于 Type IIP 型限制酶,识别回文序列,经过优化的反应 Buffer 使 BsiWI 最大限度发挥功能,同时反应缓冲液包含重组白蛋白,其可增强多种酶的稳定性。
识别位点:
CGTACG
5'...C ↓ G T A C G...3'
3'...G C A T G ↑ C...5'
同裂酶:PspLI, Pfl23II
注:同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。
BpiI属于Type IIS型限制酶,特异性识别GAAGAC序列,并在下游进行切割,产生4碱基突出的5'末端,属于Golden Gate组装的常用酶之一。BpiI使用FastCut通用缓冲液,可搭配FastCut系列限制酶进行双酶切,用于Golden Gate组装以外的常规克隆或酶切鉴定等场景。
识别位点:
GAAGAC(2/6)
5'...G A A G A C (N)₂↓...3'
3'...C T T C T G (N)₆↑...5'
同裂酶:BstV2I, BbsI
注:同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。
BbvCI来源于短芽孢杆菌(Bacillus brevis) (L. Ge)的BbvCI基因,经大肠杆菌重组表达获得。BbvCI属于Type IIA 类限制酶,以异源二聚体形式存在,由两个不同的催化亚基构成,每个亚基具有独立的切割位点。BbvCI识别并切割非回文序列CCTCAGC(-5/-2),形成5'端3碱基突出的粘性末端。BbvCI使用FastCut反应缓冲液,可与其他FastCut系列限制酶进行双酶切,但不建议长时间酶切(超过3 h),以避免产生星号活性。
识别位点:
CCTCAGC
5'...C C↓T C A G C...3'
3'...G G A G T↑C G ...5'
ApeKI来源于超嗜热需氧古生菌(Aeropyrum pernix) K1,属于Type IIP型限制酶,识别并切割G/CWGC序列,形成3碱基突出的粘性末端。ApeKI是基因组简化测序(genotyping-by-sequencing,GBS)的首选酶之一,此外,还广泛应用于动植物遗传研究、群体进化分析及功能基因定位等领域。
识别位点:
GCWGC
5'...G↓C W G C...3'
3'...C G W C↑G ...5'
同裂酶:TseI
注:同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。
AarI属于Type IIS型限制酶,是PaqCI的完全同裂酶,识别CACCTGC序列并在其下游进行切割,形成4碱基的5'突出。不同于常规的Type IIS限制酶,AarI酶切需要两个或两个以上识别位点,搭配随酶附赠的激活剂可实现完全酶切,在没有激活剂的情况下可以酶切,但无法酶切完全。AarI的识别序列长达7碱基,在基因中的出现频率较低,尤其适合用于Golden Gate组装。
识别位点:
CACCTGC(4/8)
5'...C A C C T G C (N)₄↓...3'
3'...G T G G A C G (N)₈↑...5'
同裂酶:PaqCI
注:同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。