pH荧光探针（绿500-Dextran, 检测胞吞作用）

产品简介：

pH荧光探针是一种pH敏感型荧光染料，其荧光强度随环境pH值变化而显著改变。染料在细胞外不发荧光，在酸性室（如吞噬体、溶酶体和内体）中荧光信号显著增强，而在中性或碱性环境中，荧光较弱。pH荧光探针使得能够特异性检测细胞酸性室，从而在成像或流式分析中降低信号变异性并提高准确性。

产品特性：

1)     分子量：~11000

2)     外观：橙色固体

3)     溶解度：在水中溶解

4)     Ex(nm)：443

5)     Em(nm)：505

pH Green 500荧光探针的pH依赖性发射光谱

保存条件: 

-20℃避光保存，2年有效。

产品使用：（仅供参考）

1. 细胞的准备

将贴壁细胞按照40000~80000个/孔接种于96孔板中，每孔100μL。对于384孔板，按照10000~20000个/孔接种，每孔25μL。过夜培养。

【注意】应对每个细胞系进行单独评估，以确定佳细胞密度。

2. 制备pH Green-Dextran工作液

a)     在1 mL无菌水或含20 mM Hepes缓冲液的Hanks溶液（HHBS）缓冲液中制备1 mg/mL的pH Green-Dextra储备溶液。

【注意】储备液应立即使用，未使用的部分需要分装并于-80~-20℃保存，避免反复冻融，避免光照。

b)     用HHBS缓冲液或其他合适缓冲液稀释储备液，制备20-100μg/mL pH Green-Dextran 工作液。

【注意】如果您的待检药物受血清或白蛋白干扰，请使用HHBS缓冲液或无血清培养基进行工作液的配制。

3. 细胞内吞作用的检测

a)     吸弃步骤1中过夜培养后的原培养基，按照100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的量，加入pH Green-Dextran工作液。

【注意】pH Green-Dextran 可以从早期内体转移到晚期内体，并随后与溶酶体融合。为了便于观察内体中pH Green-Dextran，我们建议增加标记浓度、缩短加载时间，并立即进行成像。

b)     置于细胞培养箱中孵育5~20分钟。

c)      清洗并用HHBS缓冲液或生长培养基清洗并更换工作液。

d)     通过监测Ex/Em=443/505nm处的荧光来进行胞吞作用测定。

注意事项：

1.      荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2.      荧光信号在转运至溶酶体后至少能保持稳定状态一小时之久。

3.      因为溶酶体的pH值低于内体，所以溶酶体的染色通常会比内体更显著。通过荧光强度的变化可以推断出内吞 作用或溶酶体功能的变化情况。

4.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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