琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒（离心柱法）

产品介绍 

本试剂盒适用于从TAE或TBE琼脂糖凝胶上回收DNA片段，同时除去蛋白质、其他有机化合物、无机盐离子及寡核苷酸引物等杂质。采用特殊的 吸附膜和独特的缓冲液系统，选择性的吸附核酸分子，可回收100bp-30kb大小的片段，回收率可达80%以上。使用本试剂盒回收的DNA可适用 于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化、文库筛选和体外翻译等实验。

注意事项 

1 使用前检查各组分是否出现沉淀。若有，请轻轻摇晃混合均匀，或37℃水浴重新溶解。 

2 实验前使用平衡液处理吸附柱，可以充分激活硅胶膜，提高得率。平衡液处理过的柱子，最好当天使用，放置时间过长会影响效果。

3 电泳时应使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。 

4 如下一步实验要求较高，则应尽量使用TAE电泳缓冲液。 

5 切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对DNA造成损伤。 2.6 如果回收率低，可在胶充分溶解后检测pH值，如pH值大于7.5，可向含有DNA的胶溶液中加10-30μl 3M醋酸钠（pH5.2）将pH值调到 5-7之间。

使用流程

柱平衡步骤

向吸附柱 AP30中（吸附柱放入收集管中）加入500μl平衡液，12,000rpm（~13,400×g）离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回 收集管中。（请使用当天处理过的柱子）。

提取步骤

1 将单一的目的DNA条带从琼脂糖凝胶中切下（尽量切除多余部分）放入干净的离心管中，称取重量。 

2 向胶块中加入3倍体积的溶胶液（如果凝胶重为0.1g，其体积可视为100μl，则加入300μl溶胶液），50℃水浴放置，其间不断温和上下 翻转离心管，以确保胶块充分溶解。如果还有未溶的胶块，可继续放置几分钟或再补加一些溶胶液。

注意：为了提高结合效率，胶块完全溶解 后将溶液温度降至室温再上柱。 

3 将上一步所得溶液用移液器转移到吸附柱AP30中（吸附柱放入收集管中），室温放置2min。12,000rpm（~13,400×g）离心1min，倒 掉收集管中的废液，将吸附柱AP30放入收集管中。 

4 向吸附柱AP30中加入500μl洗涤液 II （请先检查是否加入无水乙醇），12,000rpm（~13,400×g）离心1min，倒掉收集管中的废液，将 吸附柱AP30放入收集管中。 

5 重复操作步骤4。

6 将吸附柱AP30放入收集管中，12,000rpm（~13，400×g）离心2min，目的是将吸附柱中残余的洗涤液 II去除。将吸附柱AP30置于室温放 置数分钟，彻底晾干，以防止洗涤液 II中残留的乙醇影响下一步实验。

7 将吸附柱AP30置于一个干净的离心管中，向吸附柱膜的中间部位滴加50-100 μl洗脱液，室温放置2min，12,000rpm（~13,400×g）离心 1min，将DNA溶液收集到离心管中，如不立即进行下游实验，于-20℃保存备用。