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质粒DNA小量抽提试剂盒（离心柱法） 

产品介绍 

本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA提取质粒DNA。离心吸附柱中采用的硅基质膜能 够高效、专一吸附DNA，杂质蛋白质及其他细胞内容物被去除达到快速纯化质粒DNA的目的。本试剂盒适用于提取1-5ml细菌培养物，质粒提取 得率和质量与宿主菌的种类和培养条件，细胞的裂解，质粒拷贝数，质粒的稳定性，抗生素等因素有关。使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于 各种常规操作，包括测序、体外转录与翻译、酶切、转化等一些常规的分子生物学实验。

注意事项 

1 使用前检查各组分是否出现沉淀。若有，请轻轻摇晃混合均匀，或37℃水浴重新溶解。 

2 第一次使用前请将RNase 全部加入溶液 P1中，混匀后置于2-8℃保存。 

3 洗涤液 I、洗涤液 II使用前请按标签提示加无水乙醇，并混合均匀。

使用流程

提取步骤

1 取1-5ml 细菌培养物，加入离心管中，使用常规台式离心机12,000rpm（~13,400×g）离心1 min ，尽量吸尽上清。（菌液较多时可以通 过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。 

2 向留有菌体沉淀的离心管中加入250 μl 溶液 P1（请先检查是否加入RNase），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀将菌体充分 悬浮。

注意：如果菌体未彻底混匀，质粒提取量和纯度会偏低。 

3 向离心管中加入250 μl 溶液 P2，温和的上下翻转6-8次使菌体充分裂解，室温静置1~ 5 min（时间不宜过长），以免质粒DNA受到破坏。 

4 向离心管中加入350 μl 溶液 P4，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。12,000rpm（~13,400×g）离心 5min。 

5 将上一步收集的上清液全部转移到吸附柱 AP50中（吸附柱放入收集管中），注意尽量不要吸出沉淀。12,000rpm（~13,400×g）离心 1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱AP50放入收集管中。 

6 向吸附柱AP50中加入500ul洗涤液I（请先检查是否加入无水乙醇），12,000rpm（~13,400×g）离心 1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱AP50放入收集管中。

7 向吸附柱AP50中加入500μl 洗涤液 I（I请先检查是否加入无水乙醇），12,000rpm（~13,400×g）离 心 1min ，倒掉收集管中的废液，将吸附 柱AP50 放入收集管中。 

8 重复操作步骤7 。 

9 将吸附柱AP50放入收集管中，12,000rpm（~13,400×g）离 心 2min，目的是将吸附柱中残余的洗涤液 II去除，否则洗涤液 II中的乙醇会影 响后续的实验如酶切、PCR等。 

10 将吸附柱AP50置于一个干净的离心管中，向吸附柱膜的中间部位悬空滴加50-100μl洗脱液，室温放置2min，12,000rpm（~13,400×g） 离心2min将质粒溶液收集到离心管中，如不立即进行下游实验，于-20℃保存备用。洗脱缓冲液体积不应少于50μl，体积过小影响回收效率。为了增加质粒的回收效率，可将得到的洗脱液重新加入吸附柱中，室温放置2min，12,000rpm离心1min。

低拷贝或大质粒（＞10 kb）提取

如果所提质粒为低拷贝或大于10kb的大质粒，应加大菌体用量，使用5-10ml过夜培养物，同时按照比例增加溶液P1、溶液 P2和溶液P4的 用量，洗脱液应在65-70℃水浴预热，在吸附和洗脱步骤时可以适当的延长时间，以增加提取效率，其他步骤相同。

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