产品简介：

嘌呤霉素（Puromycin）是白黑链霉菌（Streptomyces alboniger）产生的一种氨基糖苷类抗生素，可快速、高效地终止真核与原核生物的蛋白质合成。其结构与氨酰-tRNA3′末端相似，能进入核糖体A位并掺入延伸中的肽链，造成链的提前释放与永久终止，从而杀死细胞：对革兰氏阳性菌作用最强，对酸杆菌次之，对革兰氏阴性菌及真核微生物（藻类、原生生物）亦有抑制；哺乳动物和昆虫细胞在2μg/mL以上浓度、48h内即可被清除99%以上。此外，嘌呤霉素还表现出一定抗肿瘤活性，常被用作研究转录调控、细胞分化及基因表达顺序的蛋白合成抑制剂。

抗性由pac基因编码的嘌呤霉素N-乙酰转移酶（PAC）赋予，该酶通过乙酰化使药物失活。由于pac基因已广泛克隆至慢病毒、逆转录病毒及多种真核/原核表达载体，嘌呤霉素成为筛选和维持稳定转染/感染细胞株（尤其是慢病毒系统）以及CRISPR/Cas9编辑后阳性克隆的首选药物。个别情况下亦可用于携带pac的大肠杆菌筛选。

本品为10mg/mL、经0.22μm过滤除菌的嘌呤霉素盐酸盐水溶液，可直接用培养基稀释。真核细胞常规筛选浓度1–10μg/mL，具体用量请依据细胞类型预实验确定。

产品特性

1） 化学名：3'-[α-Amino-p-methoxyhydrocinnamamido]-3'-deoxy-N,N-dimethyladenosine dihydrochloride

2） 同义名：Stylomycin hydrochloride; CL 13900 dihydrochloride; P638 dihydrochloride; CL16536; NSC 3055;

3） CAS NO.：58-58-2

4） 分子式：C₂₂H₂₉N₇O₅·2HCl

5） 分子量：544.43g/mol

6） 外观：无菌溶液

7） 纯度：＞98% (HPLC)

保存条件: 

-20℃保存（1年有效）

产品使用：

1、 试剂准备

第一次收到本品，可根据单次用量，将嘌呤霉素（10mg/ml）无菌分装，置于-20℃保存，尽量减少反复冻融次数。

2、建议工作浓度

哺乳动物细胞：1-10μg/ml，最佳工作浓度使用宿主细胞杀灭实验（杀灭曲线）来确定；

大肠杆菌：LB琼脂培养基筛选敏感转化菌株，使用浓度为100-125μg/ml。

【注意】：使用嘌呤霉素筛选大肠杆菌阳性转化子不仅需精确的pH值调节，而且受宿主细胞本身状态影响。

3、杀灭曲线的建立

嘌呤霉素合适的筛选浓度与细胞类型、生长状态、细胞密度、代谢情况，以及细胞所处周期等因素有关。为了筛选到稳定表达的细胞株，确定杀死未转染或感染细胞所需的最低浓度嘌呤霉素至关重要。建议初次实验一定要建立杀灭曲线（kill curve），筛选到适合自身实验体系的最优筛选浓度。

1）于24孔板加入500μl/孔制备好的细胞悬液，铺足够的孔以保证后续的梯度实验。37℃细胞孵育过夜。理想情况开始抗生素筛选时，细胞达到较高的密度（~60-80%），常用的细胞密度如下：

贴壁细胞：0.8 - 3.0 x 10⁵ cells/ml

悬浮细胞：2.5 - 5.0 x 10⁵ cells/ml

2）准备筛选培养基：含梯度浓度嘌呤霉素的新鲜培养基（比如，设置0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10μg/ml，这11个筛选浓度，每个浓度2个复孔）；

3）将孵育过夜的细胞清洗后，更换新鲜制备的梯度筛选培养基；之后置于37℃，5%CO2培养箱内孵育；

4）根据细胞的生长状态，约2-3天更换新鲜的筛选培养基；

5）每日监测细胞，观察存活细胞率，从而确定抗生素筛选开始4-6天内有效杀死非转染或者所有非感染细胞的抗生素最低浓度，也就是将用到的最优筛选浓度。

【注意】：如果发现细胞开始变圆但没有从平板表面脱落可能是以下情况，

a）变圆但是未脱落是细胞开始死亡的一个信号，这些需要更长的筛选时间；

b）若在建议浓度1-10μg/ml范围内还不能完全处死细胞，此时需要检测药物是否有效，避免药物的反复冻融（<5）。

注意事项：

1. 嘌呤霉素为有毒化合物，操作时需注意防护，切勿与身体或皮肤直接接触。

2. 了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

常用筛选抗生素及其使用浓度: