外泌体提取纯化试剂盒（组织）

【温馨提示】：见我司整理的专注外泌体研究，外泌体提取专家，专注外泌体提取试剂盒产品专题。

产品简介：

外泌体是由细胞分泌的包含RNA和蛋白质的小囊泡（30-150 nm），在血液、唾液、尿液及乳汁等体液中大量存在。外泌体被认为具有细胞间信使的功能，在特定细胞之间传递它们的效应物或信号分子；然而其构造、效应物组成以及所参与的生物学通路目前尚不明晰。

外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒，而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。由本公司自主开发的外泌体提取纯化试剂盒，组分经过优化处理，适用于多种组织的外泌体提取（包括脑、心、肝、肺、肌肉、脾、淋巴结、胸腺、胚胎、肿瘤等组织），可快速高效地获得高纯度外泌体颗粒，可用于电镜分析、 NTA 粒径分析、核酸分析、蛋白分析、细胞学实验和动物实验等。

保存条件: 

Solution A2存储于-18℃以下；其他组分常温保存；有效期2年。

产品组成：

* Nuclease-free, Sterile

自备材料：

高速离心机，涡旋振荡器，2 mL离心管，1.5 mL离心管，1×PBS缓冲液（无菌）。

产品使用：

一、 样品预处理

1.      提前将Solution A2置于4℃或冰上融化并混匀；

2.      组织剪碎：在消毒器皿（置于冰上）中将组织剪切成1 mm³～3 mm³左右的碎组织块 （剪切得越小越好）；

3.      组织碎片清洗：将组织碎块转移至离心管中，加入不少于10 倍体积的1×PBS缓冲液，振荡混匀后300 ×g（~2,000 rpm*）离心10 min，弃上清；

*为约7 cm有效离心半径的小离心机换算（≤2 mL离心管），下同。

4.      组织消化：按照每0.1 g组织块加入1 mL Solution A2 的比例，将组织块与Solution A2混匀在2 mL离心管中，横放于37℃、80 rpm恒温摇床上孵育20 min（或在37℃水浴锅中孵育30 min，每5 min混匀一次）；

5.      离心取上清：反应液以8,000 ×g（~10,100 rpm）离心10 min，将上清液转移至新的离心管中；

6.      离心去杂质碎片：将离心上清液转移至新的离心管中，于4℃以12,000 ×g（~12,400 rpm）离心10 min，去除样品中的杂质碎片；

7.      上清液转移：去除杂质碎片的上清液转移到新离心管中。

二、 提取外泌体

1.      加Solution B2 试剂：上一步获得的上清液中加入1/4 体积的Solution B2 试剂；

2.      溶液混合：将离心管盖紧，通过涡旋振荡器混匀1 min， 再放置于4℃静置1 h以上（注：增加静置时间可提高外泌体得率，但不可超过24 h）；

3.      沉淀外泌体：取出装有混合液的离心管于4℃以12,000 ×g（~12,400 rpm）离心30 min，弃上清，沉淀中富含外泌体颗粒（尽可能吸尽上清液）；

4.      再次离心：将含有沉淀的离心管再次于 4℃以 12,000 ×g（~12,400 rpm）离心2 min，弃上清（注：尽可能吸尽上清液）；

5.      外泌体重悬：取合适量的1×PBS均匀吹打离心沉淀物，待其溶解后，将重悬液转移至新的1.5 mL离心管中（建议每0.1 g组织用200 μL左右1×PBS重悬）；

6.      收获外泌体颗粒：将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃ 以12,000 ×g（~12,400 rpm）离心2 min，保留上清液，其中富含外泌体颗粒（注：若沉淀较多，可12,000 ×g，2 min离心多次至无明显沉淀，每次取上清液）。

三、 纯化外泌体

1.      纯化外泌体：将收获的外泌体颗粒粗品转入 Exosome Purification Filter（EPF 柱）上室中，于 4℃以 3,000 ×g（~6,200 rpm）离心10 min，离心后收集EPF柱管底的液体，此液体即为纯化后的外泌体颗粒（注：EPF柱不可重复使用）；

2.      外泌体的保存：纯化后的外泌体以合适体积进行分装冻存于-80℃低温冰箱中，以备后续实验使用。

注意事项：

1.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

常见问题及解决方法：

一、 产品试剂保存问题：

1.      Solution A2 使用前后应保存于-18℃条件下，建议分装后使用，应避免反复冻融；

2.      Solution B2 始终保存在室温条件下即可，温度过低可能使该溶液中出现白色结晶，且难以复溶（需要高温），少量沉淀不影响提取效果。

二、 纯化柱使用问题：

1.      一般情况下，每个样品按照说明书操作，“3,000 ×g （~6,200 rpm）离心10 min”即可一次性纯化完毕。 如果上柱中仍有液体残留，将纯化柱转换方向放置于离心机中（区别于上一次放置方向即可），再次重复离心；

2.      若通过上述操作，上柱中仍有较多液体残留，请将上柱中的液体转移至新的纯化柱中，继续重复离心操作，直至上柱液体全部转移至下柱中。

三、 外泌体得率问题：

一般情况下，0.1 g组织样品（以心肌组织为例）可以提取出100~200 μg外泌体（5E+9~1E+10 Particles 总量），因不同组织外泌体含量不同，得率会有一定差异。

本产品仅用于生命科学研究，不得用于医学诊断及其他用途！

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