<NW3213> 外泌体提取纯化试剂盒（乳液）
<NW3213> 外泌体提取纯化试剂盒（乳液）
货号：NW3213-2T;
NW3213-20T
品牌：NoninBio
外泌体提取纯化试剂盒（乳液）
产品编号 | 产品名称 | 包装规格 |
NW3213-2T | 外泌体提取纯化试剂盒（乳液） | 2T |
NW3213-20T | 外泌体提取纯化试剂盒（乳液） | 20T |
【温馨提示】：见我司整理的专注外泌体研究，外泌体提取专家，专注外泌体提取试剂盒产品专题。
产品简介：
外泌体是由细胞分泌的包含RNA和蛋白质的小囊泡（30-150 nm），在血液、唾液、尿液及乳汁等体液中大量存在。外泌体被认为具有细胞间信使的功能，在特定细胞之间传递它们的效应物或信号分子；然而其构造、效应物组成以及所参与的生物学通路目前尚不明晰。
外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒，而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。由本公司自主开发的外泌体提取试剂盒，组分经过优化处理，适用于乳液中的外泌体提取，可快速高效地获得外泌体颗粒，可用于电镜分析、NTA粒径分析、核酸分析、蛋白分析、细胞学实验和动物实验等。
保存条件:
室温保存，2年有效。
产品组成：
名称 | NW3213-2T | NW3213-20T |
Solution A* | 50 mL | 5 mL |
Solution B* | 60 mL | 6 mL |
Solution C* | 60 mL | 6 mL |
Solution D* | 120 mL | 12 mL |
50 mL离心过滤柱 | 20 个 | 2 个 |
* Nuclease-free, Sterile
自备材料：
高速离心机，涡旋振荡器，50 mL离心管，1.5 mL离心管，1×PBS缓冲液（无菌）。
产品使用：
一、 样品预处理
1. 取样：如果是冻存样品，从冰箱取出后于25℃水浴中进行解冻，将完全融化后的样品置于冰上，如果是新鲜样品，收集样品后置于冰上；
2. 样品初始用量：单次提取时的乳液量建议不低于25 mL；
3. 离心去脂：将样品转移至离心管中，于4℃以10,000 ×g （~9,500 rpm**）离心20 min，去除样品中的脂质及部分蛋白（注：离心后样品分为三层，上层为脂质层，下层为蛋白沉淀，中间层为乳清。离心后上层状态为“致密、稳定、不易脱落”，若上层“松软、易脱落”且下层沉淀较多，可重复此步骤，每次离心取中间层液体）；
**为约10 cm有效离心半径的大离心机换算（≥15 mL离心管），下同。
4. 乳清转移：将去除脂质的乳清（中间层液体）转移至新的50 mL离心管中（注：可用枪头将上层脂质戳破后缓慢倾倒，或用移液器转移，转移后的乳清中带有少量脂质和沉淀是正常现象，不影响后续实验）。
二、 去除杂蛋白
1. 乳清澄清：乳清中加入 Solution A，将离心管颠倒混匀至呈现“半透明状”，再加入Solution B，颠倒混匀后于2℃至8℃静置10 min；（注：静置完成后轻轻晃动离心管，呈现“豆花状”固体，液体部分为“透明状”。若未呈现“豆花状”或样品仍为“乳白色”，可再适当加入Solution B至液体为“透明状”）；
乳清体积 | Solution A 剂量 | Solution B 剂量 |
20 mL | 2 mL | 2.5 mL |
注：具体加入量根据乳清体积按上表等比例换算
2. 离心去蛋白：将澄清后的乳清于 4℃以 10,000 ×g （~9,500 rpm**）离心10 min，收集上清液；
3. 上清液过滤：将收集的上清液转移至50 mL离心过滤柱中，于4℃以5200 rpm（~3000 ×g）离心2 min(注：若未过滤完全，可重复此步骤。50 mL离心过滤柱为一次性耗材，不建议重复使用)；
4. 将过滤后的上清液转移至新离心管中，加入Solution C 后颠倒混匀（注：Solution C加入剂量和Solution B 剂量保持一致）。
三、 提取外泌体
1. 上清液预处理：在加入Solution C后的上清液中加入Solution D，具体加入剂量如下（其他剂量请根据表中的用量等比例换算）：
样品名称 | 样品剂量 | 加入Solution D剂量 |
乳清 | 20 mL | 5 mL |
2. 溶液混合：加入Solution D后将离心管盖紧，通过涡旋振荡器混匀1 min，再放置于4℃静置1 h以上（注：增加静置时间可提高外泌体得率，但不可超过24 h）；
3. 沉淀外泌体：取出装有混合液的离心管于4℃以10,000 ×g（~9,500 rpm**）离心60 min，弃上清，沉淀中富含外泌体颗粒（注：尽可能吸尽上清液）；
4. 再次离心：将含有沉淀的离心管再次于 4℃以10,000 ×g（~9,500 rpm**）离心2 min，弃上清（注：尽可能吸尽上清液）；
5. 外泌体重悬：取合适量的1×PBS均匀吹打离心沉淀物，待其溶解后，将重悬液转移至新的1.5 mL离心管中（建议每25 mL乳液用200 μL左右1×PBS重悬）；
6. 收获外泌体颗粒：将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃ 以12,000 ×g（~12,400 rpm*）离心2 min，保留上清液，其中富含外泌体颗粒（注：若沉淀较多，可12,000 ×g，2 min 离心多次至无明显沉淀，每次取上清液，外泌体溶液可能带有淡淡的乳白色，此为正常现象）。
*为约7 cm有效离心半径的小离心机换算（≤2 mL离心管）。
7. 外泌体的保存：纯化后的外泌体以合适体积进行分装冻存于-80℃低温冰箱中，以备后续实验使用。
注意事项：
1. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
本产品仅用于生命科学研究，不得用于医学诊断及其他用途！
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产品编号 | 产品名称 | 包装规格 |
120ml | ||
20T | ||
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30T | ||
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30T | ||
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5T | ||
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20T | ||
20T | ||
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公司名称：上海诺宁生物科技有限公司
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