RNA抽提试剂（25:24:1替代试剂），pH＜5.0

产品简介：

RNA抽提试剂（25:24:1替代试剂，pH＜5.0）由水饱和酚、氯仿替代物和异戊醇按25:24:1的体积比混合而成的，是传统苯酚-氯仿-异戊醇溶液25:24:1的优秀替代品。该抽提液pH小于5.0，可以保证分相后RNA存在于上层水相中，主要用于样品中的RNA抽提/RNA提取，不能用于DNA的提取。

酸性酚可使蛋白质变性，同时抑制了RNase的降解作用。氯仿抽提可加速有机相与液相分层，去除核酸溶液中的迹量酚。异戊醇可以减少抽提过程中泡沫的产生。

其提取RNA的原理是样品通过RNA裂解缓冲液裂解后释放出RNA，再通过RNA抽提溶液(25:24:1)抽提，去除样品中蛋白、多糖、酚类等杂质，再加入乙醇或异丙醇等沉淀核酸即可使RNA分离出来。该抽提溶液可以使蛋白质变性，同时利用RNA、DNA、蛋白质三者的性质差别来分离RNA。使用酚：氯仿：异戊醇抽提离心后的上层为含RNA的水相、中间为变性蛋白与DNA，下层为有机溶剂相。

保存条件: 

2-8℃避光保存，1年有效。

自备材料：

1.      新鲜植物材料、移液器、水浴锅、1.5ml离心管、离心机、制冰机、低温冰箱

2.      2×CTAB提取液(RNase-free)、β-巯基乙醇（货号：NBS0395）、乙醇溶液(75%，RNase free)、DEPC处理水

产品使用：(仅供参考)

注意：以下程序请注意所有试剂都要保证RNase-free。

1.      配制CTAB提取液(RNase-free,含β-巯基乙醇)：临用前取10ml 2×CTAB提取液(RNase-free)，再加入0.1ml β-巯基乙醇，混匀即可使用。

2.      植物基因组RNA 提取：取0.2-0.5克新鲜植物材料，于液氮中研磨成粉末；将粉末转入1.5ml离心管中，立即加入0.7 ml 65℃预热的CTAB提取液(RNase-free,含β-巯基乙醇)，65℃水浴30分钟，间歇混匀。(注：CTAB抽提液在低于15℃时会形成沉淀析出，因此，在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃)

3.      第一次纯化：12000 rpm常温离心5分钟，转移上清至新的1.5 ml 离心管中。上清中加入等体积的RNA抽提溶液，轻缓颠倒混匀8-10次，常温12000 rpm离心10分钟。为得到更高纯度的RNA，可以重复一次。

4.      第二次纯化：将上层水相转入新的1.5ml离心管中，加入等体积的核酸抽提试剂(24:1)(货号：NBS0051)，，颠倒混匀8-10 次，常温12000 rpm离心10分钟。

5.      沉淀RNA：将上层水相转入新的1.5ml离心管中，加入1/2体积7.5M LiCl（RNase-free），轻柔混匀，-20℃静置30分钟；12000 rpm 4℃离心10分钟。

6.      漂洗RNA：去上清，沉淀中加入75%乙醇溶液或RNA沉淀剂(75%,RNase free)(货号：NBS0050)，吹打漂洗沉淀，14000g 4℃离心3分钟，吸弃乙醇。再次14000g 4℃离心1分钟，用移液器吸尽残余乙醇，超净台内吹干沉淀。(注：RNA沉淀不能过分干燥，否则不好溶解)

7.      贮存 RNA：加入50-100μl的DEPC处理水溶解RNA，-80℃保存备用。

注意事项：

1.      溶液长期静置后会有分相，下层为有机酚相。使用前摇匀并静置分相后取下层使用。

2.      本试剂有较强的腐蚀性，应尽量避免皮肤接触或吸入体内。

3.      每次转移水相应使用新枪头，防止有机相混入，造成交叉污染。

4.      本品含酚和氯仿类似物，具有挥发性，且有一定毒性，操作时需佩戴手套并在通风环境下进行，使用完毕后应及时密封保存。

5.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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