快速碱性磷酸酶

Alkaline Phosphatase (Fast)

产品简介：

Alkaline Phosphatase (Fast)可催化DNA、RNA以及核苷酸5'端和3'端磷酸基团的水解，也能够去除蛋白磷酸基团，但不能催化磷酸二脂及磷酸三脂的水解。在37℃的条件下作用10分钟，该酶即可使所有类型DNA的末端去磷酸化。由于该酶在CutOne™ 酶切Buffer中具有100%活性，且失活条件为80℃温育20分钟，因此与FastCut®快速内切酶进行“酶切-去磷酸化”反应时，可在同管内完成，大大简化了实验流程。

产品组成：

保存条件: 

-20℃保存，2年有效。

活性定义:

37℃条件下，Alkaline Phosphatase缓冲液环境中，10 min内能够将1 μg线性化pUC57 DNA的5'末端去磷酸化所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。

核酸内切酶残留检测：

将酶液与超螺旋质粒DNA在37℃温育4 h，通过DNA电泳检测质粒无变化。

核酸外切酶残留检测：

将酶液与双链DNA底物在37℃温育16 h，通过DNA电泳检测双链DNA底物无变化。

宿主检测：

将酶液中残留的核酸经E.coli 16S rDNA特异性的Taq Man qPCR检测，E.coli基因组残留低于10拷贝。

使用方法：

1. 质粒载体线性化与去磷酸化同步反应流程

① 于冰上配制如下反应体系：

a. 为了保证去磷酸化的效率，质粒DNA应不含RNA和基因组DNA污染。

② 充分混匀并瞬离，37℃温育15~30 min。

注：如果延长温育时间，可能产生星号活性。

③ 80℃温育20 min，以终止反应。

2. 核苷酸去磷酸化的实验流程

该方案适用于去除DNA的3'和5'端磷酸基团。

① 于冰上配制如下反应体系：

② 充分混匀并瞬离，37℃温育10 min。

③ 80℃温育20 min，以终止反应。

3. 蛋白质去磷酸基团的实验流程

① 于冰上配制如下反应体系：

② 充分混匀并瞬离，37℃温育1 h；

③ 添加EDTA至50 mM的终浓度，或者添加钒酸钠（Na₃VO₄）至 10 mM的终浓度，以终止反应。

注：以上为蛋白质去磷酸基团的反应体系和实验流程的举例，实验时请根据具体底物类型调整Alkaline Phosphatase的使用量以及最佳温育时间。

注意事项：

1.      与Alkaline Phosphatase结合的DNA在琼脂糖凝胶中可能会出现条带偏移或弥散，为避免此现象，可在样品中加入混有SDS的6× Loading Buffer，先在80℃温育20 min，冰浴降温后再进行电泳。

2.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。