T4多聚核苷酸激酶（T4 PNK）

T4 Polynucleotide Kinase

产品简介：

T4 Polynucleotide Kinase（简称 T4 PNK），中文名称 T4 多聚核苷酸激酶，是一种多聚核苷酸 5'-羟基激酶，能够催化 ATP 的 γ - 磷酸基团转移到寡核苷酸链（双链或单链 DNA 或者 RNA）或 3'-单磷酸核苷上的 5'-羟基末端，且该反应过程可逆。此外，T4 PNK还具有 3'磷酸酶活性，可以将 3'-磷酸基团从寡核苷酸的 3' 磷酸末端、脱氧 3'-单磷酸核苷和脱氧 3'-二磷酸核苷上水解掉。

产品组成：

保存条件: 

-20℃保存，2年有效。

产品应用：

1.对DNA或RNA 5'末端进行磷酸化，以便进行连接反应。

2. DNA或RNA的末端标记，用作探针和进行DNA测序。 3.除去 3' 磷酸基团。

活性定义:

1活性单位 (U) 定义为在1× T4 PNK Buffer中，37℃、30 min 内使1 nmol的[γ-32P] ATP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量。

蛋白纯度检测:

经SDS-PAGE凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于95%。

非特异性内切酶活性：

37℃下，在20 μl反应体系中将10 U T4 Polynucleotide Kinase 与200 ng超螺旋质粒DNA共同温育4 h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于20%的质粒DNA转变成缺刻或线性状态。

DNase 活性：

37℃下，在20 μl反应体系中将10 U T4 Polynucleotide Kinase 与15 ng双链DNA片段共同温育16 h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，双链DNA片段无变化。

RNase活性：

37℃下，在10 μl反应体系中将10 U T4 Polynucleotide Kinase 与500 ng RNA共同温育1 h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，超过90% 的RNA保持完整。

宿主DNA残留：

采用中国药典2020版四部通则3407外源性DNA残留量测定法第三法定量PCR 法，本品中大肠杆菌宿主细胞DNA残留量低于1拷贝/10 U。

使用方法：

1. DNA 5'末端磷酸化：

a. 10× T4 PNK Buffer不含ATP，需自行准备。

① 将上述体系充分混匀后，37℃温育30 min；

② 反应完成后，75℃温育10 min使T4 Polynucleotide Kinase失活。

2. DNA 5' 末端标记：

b. 10× T4 PNK Buffer不含放射性标记的ATP，需自行准备。

① 将上述体系充分混匀后，37℃温育30 min；

② 反应完成后，75℃温育10 min使T4 Polynucleotide Kinase失活。

注意事项：

1.      金属离子螯合剂、磷酸盐、铵根离子、大于50 mM的KCl和 NaCl均可显著抑制T4 Polynucleotide Kinase的活性。

2.      聚乙二醇(PEG)和亚精胺可改善磷酸化反应的速率和效率。

3.      提高ATP的浓度可让缺口磷酸化。切刻位点不能有效地磷酸化。 CTP、GTP、TTP、UTP、dATP及dTTP均可以替代ATP作为磷酸供体。

4.      T4 Polynucleotide Kinase使用时宜置于冰上，使用完毕后立即放置于-20℃保存。

5.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。