T5 Exonuclease T5核酸外切酶

产品简介：

T5 Exonuclease 是一种核酸外切酶，沿5→3'方向从双链或单链 DNA 的 5' 末端消化 DNA，同时也可从线性或环状双链 DNA 的缺刻或缺口处对 DNA 进行消化。但 T5 Exonuclease 无法消化超螺旋DNA，此外，当溶液中的 Mg²⁺浓度低于1 mM 时，T5 Exonuclease对单链 DNA 的消化活性也会受到抑制。因此，T5 Exonuclease 尤其适用于从质粒中降解线性化与缺刻质粒、去除连接产物中的非环状DNA、无缝克隆(Gibson Assembly)等。

产品组成：

保存条件: 

-20℃保存，2年有效。

产品应用：

1. 降解线性单链、双链DNA或缺刻质粒DNA。

2. 去除环化双链DNA中的不完全连接产物。

3. 去除碱裂法提取质粒过程中产生的变性质粒DNA，降解线性和缺刻质粒DNA，获得高纯度的超螺旋质粒DNA。

4. 提高小提质粒cDNA文库的转染效率。

5. 常用于Gibson组装(Gibson Assembly)。

活性定义:

1 活性单位(U)是指以单链DNA为底物 ，37℃、1× Exo I缓冲液 条件下，30 min内释放10 nmol酸溶性核苷酸所需的酶量。

蛋白纯度检测:

经SDS-PAGE凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于95%。

内切酶残留检测：

将 10 U T5 Exonuclease 与 1 μg 超螺旋质粒 DNA 在 37℃下，共同温育 4 h 后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于10% 的质粒 DNA 转变成缺刻状态。

宿主DNA残留检测：

使用大肠杆菌16S rDNA 特异性引物，采用荧光定量PCR法检10 U T5 Exonuclease，大肠杆菌宿主基因组DNA 残留低于1 copy。

加样体系：

反应条件：

37℃ 30 min。

失活条件：

80℃ 20 min，或加入EDTA至终浓度为至少11 mM，或 加入含SDS的DNA Loading（SDS终浓度需0.08%）。

注意事项：

1.      T5 Exonuclease 是一种非特异性的DNA外切酶，对于不同类别的 DNA有不同的反应速率，进行反应时应该注意选取合适的酶量和反应时间。

2.      T5 Exonuclease 在37℃拥有最佳反应活性，在50℃也具有一定活性，可用于Gibson组装。

3.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅用于生命科学研究，不得用于医学诊断及其他用途！