T7核酸内切酶I

T7 Endonuclease I

产品简介：

T7 Endonuclease I (T7 Endo I, T7EI)，中文名称T7核酸内切酶I，可识别并切割不完全配对DNA、十字型结构DNA、Holliday结构或DNA分叉点、异源双链DNA，切割位点位于错配位点5'端的第一、第二或第三个磷酸二酯键。此外T7EI也能以很慢的速度切割含有缺刻的双链DNA。值得注意的是，T7EI可以识别长度大于或等于2个碱基对(bp)的插入、缺失或突变导致的DNA错配，但不能识别1 bp的插入、缺失或突变。同时，T7 Endonuclease I无法识别所有的DNA错配，对C错配的切割效果最佳。

本品为克隆重组T7 Endonuclease I基因后在大肠杆菌中表达纯化获得的高纯度蛋白，不含其他内切酶或外切酶污染。

产品组成：

保存条件: 

-20℃保存，2年有效。

产品应用：

1. 基因突变、SNP、TALEN或CRISPR/Cas9形成的突变体检测。

2. 检测或切割异源双链DNA和切刻的DNA。

3. 随机切割线性 DNA 进行鸟枪法克隆。

活性定义:

1活性单位是指在50 μl体系中，37℃反应1 h将1 μg超螺旋十字 形结构 pUC(AT)的90%以上转换为线性结构所需的酶量。

蛋白纯度检测:

经SDS-PAGE凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于95%。

非特异性内切酶活性：

在20 μl反应体系中将10 U T7 Endonuclease I与200 ng的质粒DNA在37℃共同温育2 h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于 20%超螺旋质粒DNA 转变成缺刻或线性状态。

DNase 活性：

在20 μl反应体系中将10 U T7 Endonuclease I与15 ng的双链 DNA片段在37℃共同温育2 h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，双链 DNA片段无变化。

使用方法：

1.配制退火反应体系

a. Control Template为突变型和野生型PCR产物 1:1 (各100 ng)的混合物，使用前需退火成含不配对的杂合链。退火后经T7EI酶切产生620 bp和175 bp条带。

2. 使用PCR仪退火

3. T7 Endonuclease I酶切

① 37℃反应15~30 min；

② 85℃加热15 min或加入1.5 μl的0.25 M EDTA 终止酶切反应。

4. 将酶切产物使用2%的琼脂糖凝胶进行电泳检测

注意事项：

1.      T7 Endonuclease I具有底物结构选择性，以不同的活性作用于不同的DNA底物。切割特定底物时必须控制酶量和反应时间以达到最佳酶切效果。

2.      反应温度超过42℃时会使T7 Endonuclease I非特异性核酸酶活性增强，超过55℃会导致酶活下降。

3.      Mn²⁺会显著增加T7 Endonuclease I非特异性核酸酶活性，请使用不含Mn²⁺的PCR Buffer进行PCR扩增。

4.      T7 Endonuclease I可兼容多种PCR Buffer，PCR产物可不经过纯化直接用于酶切检测，若酶切结果异常，可以将PCR产物纯化后再进行实验。

5.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。