Esp3I(BsmBI), ADCF 

产品简介：

Esp3I(BsmBI), ADCF经过基因工程重组，能够在15 min~1 h 内精确完成质粒DNA、PCR 产物或基因组 DNA 等的酶切。本品的发酵重组表达、纯化、制剂等各个环节，都不使用包含动物来源的成分，也未使用抗生素。

识别位点：

CGTCTC(1/5)
5'...C G T C T C (N)₁↓...3'
3'...G C A G A G (N)₅↑...5'

同裂酶：BsmBI

注：同裂酶对于不同的甲基化修饰也许具有不同敏感性。

注：ADCF(animal derived component free), 不含动物源性相关组分。

产品组成：

保存条件: 

-20℃保存，2年有效。

特性和用法:

• 生产全程无动物源性成分

• 质量标准更高，严格控制宿主残留

• 满足疫苗生产要求

失活条件：

80℃温育20 min。

甲基化敏感性：

对于被 CpG 甲基化的DNA，剪切可能受阻。

活性定义:

1活性单位 (U) 是指在50 μl反应体系中，37℃ 1 h内完全酶切1 µg λDNA 所需的酶量。

蛋白纯度检测:

本品经SDS-PAGE检测纯度 ≥95%。

DNase 残留检测：

将50 U酶液与双链DNA底物在37℃温育16 h，通过DNA电泳检测双链DNA底物无变化。

RNase 残留检测：

将50U酶液与RNA 在37℃温育1h，通过电泳检测RNA 无降解。

酶切 - 连接 - 再酶切检测：

最适反应温度下，将50 U酶液消化底物，回收酶切产物，在 22℃下使用适量T4 DNA Ligase (Fast)可以将酶切产物重新连接 , 将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

宿主DNA残留检测：

将酶液中残留的核酸经E.coli 16S rDNA特异性的TaqMan qPCR检测，E.coli 基因组残留低于10 pg。

宿主蛋白残留检测：

本品经ELISA法检测 E.coli 宿主蛋白含量 ≤ 50 ppm。

微生物限度检测：

本品经微生物计数法检测，需氧菌总数≤5 cfu/ml，霉菌和酵母菌总数≤5 cfu/ml。

细菌内毒素残留检测：

本品细菌内毒素残留＜1EU/KU

使用方法：

① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

a. DNA 底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响 Esp3I, ADCF 酶活性；甲基化的 DNA 会抑制某些限制性内切酶酶切反应。

② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

③ 37℃ 温育15 min~1 h，一般推荐5 U~10 U酶/μg DNA、10 U~20 U酶/μg 基因组DNA，温浴1 h，如需过夜酶切反应，请将酶量调整至2.5 U；

④ 80℃ 温育 20 min 即可使酶失活，停止反应，或者通过吸附柱或苯酚 / 氯仿纯化终止反应；

⑤ 反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的10%，避免酶中过多的甘油引起星号活性； ⑥ 限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂 ( 例如甘油、盐 ) 与底物溶液中的污染物 ( 例如盐、EDTA 或乙醇等 ) 相同，反应体积越小，酶切反应抑制效应越强；

⑦ 小体系推荐加样体系：

b. 为避免蒸发，10 μl反应体系的孵育时间不应超过1 h。

不同DNA中的酶切位点数量

甲基化修饰影响

注意事项：

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。