磁珠法总RNA提取试剂盒（单条孔）

产品介绍 

磁珠法总RNA提取试剂盒，为客户提供一套从动物组织、植物组织、培养细胞、细菌中纯化完整、高质量总RNA。试剂盒采用独特的缓冲液系统， 快速裂解细胞，沉淀蛋白，再经过醇介导将核酸分子结合于纳米磁珠表面，再经DNA酶I处理去除基因组DNA，最终得到纯度高，完整性好的总 RNA。可用于RT-PCR、Real-Time PCR、芯片分析、Northern杂交等多种下游实验。

注意事项 

1 使用前检查各组分是否出现沉淀。若有，请轻轻摇晃混合均匀，或37℃水浴重新溶解。

2 β-巯基乙醇请4℃保存，使用前在RNA裂解液中加入400μl的β-巯基乙醇至终浓度为4%，加入β-巯基乙醇的RNA裂解液于4℃保存，有效期 6个月。 

3 戴一次性干净手套和口罩操作，防止皮肤、唾液和实验室用品上存在的RNase污染。 

4 使用无菌无RNase的塑料制品和枪头。 

5 若使用玻璃器皿须经过0.1% DEPC水在37℃下浸泡12小时，然后经过 121℃高压灭菌30分钟，烘干后使用。

6 配制相关的试剂必须使用经过121℃高压灭菌的0.1% DEPC水。

使用流程

样本预处理 

1 组织样品 取10-20mg动物组织，置于液氮中快速研磨成粉末，立即加入200μl RNA裂解液（已加入β-巯基乙醇），也可将组织置于离心管中，迅速加入 200μl RNA裂解液（已加入β-巯基乙醇），用普通玻璃匀浆器或者电动匀浆器将组织彻底研磨均匀。

2 细胞样品 收集2-5×106个细胞。 对于贴壁细胞，吸弃培养液，加入200μl RNA裂解液（已加入β-巯基乙醇）。用移液器反复吹打混匀直至细胞团消化不见为止，转移到干净的 离心管内。 对于悬浮细胞：5000rpm（~3056×g）离心5min，吸弃培养液，收集细胞，每2-5×106个细胞加入200μl RNA裂解液（已加入β-巯基乙醇）。 用枪头反复吹打混匀直至看不到细胞团为止。

3 植物组织样品 将液氮研磨好的粉末立即转移到RNA裂解液中，按照每10-20mg加入200μl RNA裂解液（已加入β-巯基乙醇），用移液器吹打均匀至无明显的粉末团。

4 细菌样品 用100μl新鲜配制的含溶菌酶的TE缓冲液重悬细菌沉淀。革兰氏阳性细菌可使用3mg/ml(终浓度)的溶菌酶，轻轻混匀，室温孵育 5-10min，加入200μl RNA裂解液（已加入β-巯基乙醇），用枪头吹打混匀；革兰氏阴性细菌则采用0.4mg/ml(终浓度)的溶菌酶，轻轻敲打 混匀，室温孵育3-5min。加入200μl RNA裂解液（已加入β-巯基乙醇），用枪头吹打混匀。

自动化法提取 -MagET™ Smart 8

1 向3.1处理好的样品匀浆液中加入400μl RNA中和液，混匀。室温放置3-5min。如果动物组织样品来源比较珍贵，可以选择裂解物加入 RNA中和液后，置于70℃加热5min，提高RNA得率。 

2 室温，12,000rpm（~13,400×g）离心1min，小心吸取上清液备用。

3 按如下比例配制DNase I反应混合液，并轻轻混匀。

4 取出MagET™ 总RNA预分装试剂条 ，颠倒混匀数次使磁珠重悬，轻甩MagET™ 总RNA预分装试剂条使试剂及磁珠集中到试剂条底部。 

注：使用前小心撕去铝箔封口膜，避免MagET™ 总RNA预分装试剂条剧烈振动，防止液体溅出。

5 将50μl的 DNase I反应混合液加入到MagET™ 总RNA预分装试剂条的第3孔内。

6 在MagET™ 总RNA预分装试剂条的第2孔中加入步骤2的全部上清液，将MagET™ 总RNA预分装试剂条置于MagET™ Smart 8的试 剂盒支架上。

7 用移液器准确吸取100μl无核酸酶水，加入到MagET™ 洗脱管中，将MagET™ 洗脱管安装于MagET™ Smart 8的试剂盒支架上，将试 剂盒支架安装于 MagET™ Smart 8设备底座上。

注：请在加样后1 h内上机运行程序。

8 将MagET™ 4孔磁棒套插入MagET™ Smart 8的磁棒套架卡槽内。

9 选择程序并运行，自动化程序结束后，取下MagET™ 4孔磁棒套丢弃，拿出试剂盒支架，取下MagET™ 洗脱管，盖上管盖，即得总RNA产物。如不能及时进行下游试验，RNA样本可短期保存于-80℃。

表1. MagET™ Smart 8 程序设定