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总RNA提取试剂盒（离心柱法）

产品介绍 

本试剂盒采用离心吸附柱技术和新型的溶液体系，为客户提供一套从动物组织、植物组织、培养细胞、细菌中纯化完整、高质量总RNA。试剂盒 采用独特的缓冲液系统，快速裂解细胞，沉淀蛋白，高效专一吸附核酸分子，再经DNA酶I处理去除基因组DNA，最终得到纯度高，完整性好的 总RNA。可用于RT-PCR、Real-Time PCR、芯片分析、Northern杂交等多种下游实验。

注意事项

1 使用前检查各组分是否出现沉淀。若有，请轻轻摇晃混合均匀，或37℃水浴重新溶解。 

2 β-巯基乙醇请4℃保存，使用前在RNA裂解液中加入800μlβ-巯基乙醇至终浓度为4%，加入β-巯基乙醇的RNA裂解液于4℃保存，有效期6个 月。 

3 戴一次性干净手套和口罩操作，防止皮肤、唾液和实验室用品上存在的RNase污染。 

4 使用无菌无RNase的塑料制品和枪头。 

5 若使用玻璃器皿须经过0.1% DEPC水在37℃下浸泡12小时，然后经过 121℃高压灭菌30分钟，烘干后使用。 

6 配制相关的试剂必须使用经过121℃高压灭菌的0.1% DEPC水。

使用流程

样品预处理

1 组织样品 

取10-20mg动物组织，置于液氮中研磨成粉末，立即加入200μl RNA裂解液（已加入 β-巯基乙醇），也可将组织置于离心管中，迅速加入200μl RNA裂解液，用普通玻璃匀浆器或者电动匀浆器将组织彻底研磨均匀。

2 细胞样品 

收集1-5×106个细胞。对于贴壁细胞，加入200μl RNA裂解液。用移液器反复吹打混匀直至细胞团消化不见为止，转移到干净的离心管内。对于悬浮细胞：常规桌面离心机5000rpm（约3056g）离心5min，收集细胞，每1-5×106个细胞加入200μl RNA裂解液。用移液器反复吹打混匀直至 看不到细胞团为止。

3 植物组织样品

将液氮研磨好的粉末立即转移到RNA裂解液中，按照每10-20mg加入200μl RNA裂解液，用移液器吹打均匀至无明显的粉末团。

4 细菌样品

用100μl新鲜配制的含溶菌酶的TE缓冲液重悬细菌沉淀。革兰氏阳性细菌可使用3mg/ml(终浓度)的溶菌酶，轻轻混匀，室温孵育5-10min，加 入200μl RNA裂解液，用枪头吹打混匀；革兰氏阴性细菌则采用0.4mg/ml(终浓度)的溶菌酶，轻轻敲打混匀，室温孵育3-5min。加入200μl RNA裂解液，用枪头吹打混匀。

RNA 提取

1 向预处理好的样品匀浆液中加入400μl RNA中和液，混匀。室温放置3-5min。如果动物组织样品来源比较珍贵，可以选择裂解物加入 400μl RNA 中和液后置于70℃加热5min，提高RNA得率。

2 室温，常规桌面离心机12,000rpm（~13,400×g）离心1min，小心吸取上清液到新的1.5ml无核酸酶的EP管中。

3 加入 1/2 倍上清体积的无水乙醇，用移液枪吹打3-4次以混匀。

4 将混合液全部转移到RNA吸附柱RP20内（吸附柱位于收集管内），如果混合液体积大于800μl，需分批加入。每次加入的体积不超过800 μl。12,000rpm（~13,400×g）离心 1min，弃滤液。将RNA吸附柱放入收集管中。

5 向RNA吸附柱中加入600μl RNA洗涤液 I（已加入无水乙醇），12,000rpm（~13,400×g）离心1min，弃滤液。将RNA吸附柱放入收集管中。

6 按如下比例配制DNase I反应混合液，并轻轻混匀。

7 向 RNA 吸附柱膜中央加入50μl新鲜配制的DNase I反应混合液，室温静置15min。

8 向 RNA 吸附柱中加入600μl RNA洗涤液 II（已加入无水乙醇），12,000rpm（~13,400×g）离心1min，弃滤液。

9 重复步骤8 一次。将RNA吸附柱放入收集管中，12,000rpm（~13,400×g）离心2min ，目的是甩干管壁上残留的RNA洗涤液 II，避免残留的乙醇影响下游实验。

10 将 RNA 吸附柱转移至洗脱管中，向RNA吸附柱膜中央加入50-100μl无核酸酶水，室温静置2min，12,000rpm（~13,400×g）离心 1min，即得总RNA产物，如不立即进行下游实验，将RNA保存在-80℃备用。

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