细胞/组织基因组DNA提取试剂盒(离心柱法)
产品线 | 产品目录名称 | 规格 | 货号 | 目录价 |
核酸提取纯化 | 细胞/组织基因组DNA提取试剂盒(离心柱法) | 50 T | BK0012-01 | 300 |
产品介绍
本试剂盒用于快速从多种细胞/组织中提取基因组DNA,采用特异性结合DNA的离心吸附柱和缓冲液系统协同作用裂解细胞释放基因组,然后选择性去除蛋白等杂质。离心吸附柱中选用的硅基质材料为新型材料,可以高效、专一吸附DNA,最大限度的去除杂蛋白以及细胞中其他的有机 化合物。提取的基因组DNA完整性好、纯度高,质量稳定可靠。适用于PCR、酶切、文库构建、核酸杂交、二代测序等下游实验。
试剂名称 | 50 T |
裂解液 TL | 18 ml |
蛋白酶 K | 2 ml |
洗涤液 I | 18 ml |
洗涤液 II | 18 ml |
洗脱液 | 5 ml |
吸附柱 AP20 | 50 个 |
收集管 | 50 个 |
注意事项
1 使用前检查各组分是否出现沉淀。若有,请轻轻摇晃混合均匀,或37℃水浴重新溶解。
2 蛋白酶K请置于-20℃保存。
3 洗涤液 I和洗涤液 II使用前请按标签提示加无水乙醇,混合均匀,并在瓶子上做好标记。
4 结合液为异丙醇,请自备。
使用流程
样品预处理
1 贴壁培养的细胞:应先处理为细胞悬液,1,000rpm(~11,20×g)离心3min,收集培养细胞,转移到新的离心管中。
2 动物组织,应先用切取5-20mg动物组织材料,在液氮中研磨成粉末或匀浆处理为细胞悬液,转移到新的离心管中。
DNA提取
1 向预处理的样品中加入200μl裂解液 TL,20μl蛋白酶 K溶液,混匀。56℃放置10-15min,短暂离心以去除管盖内壁的水珠。
2 加入250μl异丙醇,涡旋混匀,此时可能会出现絮状沉淀,短暂离心。
3 将步骤2所得溶液和絮状沉淀全部转移到吸附柱AP20中,(吸附柱AP 20放入收集管中),12,000rpm(~13,400×g)离心1min,倒掉废液,将吸附柱AP20放入收集管中。
4 向吸附柱AP 20中加入500μl洗涤液 I(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm(~13,400×g)离心1min,倒掉废液,将吸附 柱AP 20放入收集管中。
5 向吸附柱AP 20中加入500μl洗涤液 II(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12,000rpm(~13,400×g)离心1min,倒掉废液,将吸 附柱AP 20放入收集管中。
6 重复步骤5 一次。
7 将吸附柱AP 20 放回收集管中,12,000rpm(~13,400×g)离心2min,倒掉废液,将吸附柱AP 20放入收集管中,以彻底晾干吸附柱中 残余的洗涤液 II,以免洗涤液 II中残留的乙醇影响后续的反应。
8 将吸附柱AP 20 转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50-100μl洗脱液,室温放置2-5min,12,000rpm (~13,400×g)离心2min,将溶液收集到离心管中,如不立即进行下游实验,于-20℃保存样品。