GUS染色试剂盒（组织化学法）

GUS Histochemical Stain Kit

产品简介：

GUS，英文名β-glucuronidase，中文名β-葡（萄）糖苷酸酶，一种功能非常全面的报告基因检测系统，广泛用于植物分子生物学和微生物学研究。GUS基因融合系统，根据底物的类型，对细胞/组织或蛋白提取液的GUS酶活性进行定性或定量分析。组织化学方法（定性研究）用于GUS融合蛋白表达的亚细胞定位，多以X-Gluc为底物，因其能被水解生成一无色的葡萄糖醛酸和一肉眼可见的氯-溴靛蓝（chloro-bromoindigo）深蓝色沉淀。荧光分析法（定量研究）则用于GUS融合蛋白表达水平的研究，常以MUG为底物，因其能被水解生成一无色的葡萄糖醛酸和一荧光产物4-MU（4-甲基伞型酮），蓝色荧光（Ex= 365nm，Em= 445nm）。

由于绝大多数植物细胞内不存在内源性的GUS活性，因此，GUS广泛用作转基因植物的报告基因，特别是外源基因瞬时表达的转化实验。

本试剂盒以X-Gluc为显色底物，用于GUS融合蛋白的组织化学染色（定性研究）。另，该试剂盒含染色所需的所有试剂，只需将X-Gluc溶液和GUS染色缓冲液按比例混合即可制备成GUS染色工作液。该试剂盒可制备50ml染色工作液。具有操作简单、快速，稳定，且低背景的优点。

保存条件: 

4℃保存（一年有效）

产品组成：

产品使用：（仅供参考）

1、配制X-Gluc溶液(50×)：

于实验前提前将X-Gluc（组分A）、GUS Buffer（组分C）置于室温回温至少20min；取1mLX-Gluc Solution 完全加至1支X-Gluc 管中，低速漩涡至粉末完全溶解，即获得X-Gluc溶液(50×)。配制好的X-Gluc溶液(50×)于-20℃避光保存，1个月有效。

【注意】：正常X-Gluc（50×）溶液呈无色，若溶液变为红色或棕色，说明其失效。

2、按照以下比例，混合制备GUS染色工作液。

【注意】：该染色液最好现用现配，短期贮存可以4℃保存3天。

3、取材：将根茎、叶片、花瓣等组织剪成小片，放到1.5ml离心管。

【注意】：染色用植物材料的制备方法根据特定组织和器官类型而有差异。对于拟南芥的根/花/叶片，以及烟草幼苗的根，可以不做任何预处理直接进行染色；但是，对于烟草和马铃薯的茎和叶片需要先剪切成薄片（~1-3mm）再进行染色。而，更大的组织样品，需用真空渗透法来促进染色工作液渗入细胞。

4、染色：加入适量体积现配好的染色工作液，以完全覆盖材料为准。铝箔纸包好，室温孵育3h-过夜。同时设置阴性和阳性对照实验。

5、脱色：将染色好的材料转入70%酒精中脱色2-3次，直至阴性对照材料变为白色。GUS染色阳性的蓝色斑点非常稳定，不会被酒精脱色。

6、观察：大部分GUS染色阳性的蓝色斑点肉眼能观察到，然而，有些材料可能蓝色斑点很细微，需要显微镜下才能观察到。【注意】：白色背景上的蓝色斑点即为GUS表达位点。

注意事项：

1.      GUS染色液最好冰上配制，现配现用。配制后用不完可-20℃避光保存，如果溶液由无色变为红色或紫红色应弃用。

2.      由于组织特异性等原因，蓝色颜色反应可能不完全一致，应注意摸索具体实验条件。

3.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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