D-荧光素钾盐

D-Luciferin, Potassium Salt

温馨提示：见我司整理的活体成像研究底物之：Firefly D-Luciferin D-虫荧光素（Luc基因）产品专题。

产品简介：

D-荧光素（D-Luciferin）是荧光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍用于整个生物技术领域，特别是体内活体成像技术。作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下，D-荧光素（底物）被氧化发光。当荧光素过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性。将携带荧光素酶编码基因（Luc）的质粒转染进入细胞后，导入研究动物如大小鼠体内，之后注入荧光素，通过生物发光成像技术（BLI）来检测光强度变化，从而实时监测疾病发展状态或药物的治疗功效等。也可以利用ATP对此反应体系的影响，根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。

D-荧光素也常用于体外研究，包括荧光素酶和ATP水平分析；报告基因分析；高通量测序和各种污染检测。目前有三种产品形式：D-荧光素（游离酸），D-荧光素盐（钠盐和钾盐）。主要差别在于溶解特性：

1）D-荧光素（游离酸）在水以及缓冲体系内的溶解性都很弱，除非溶于弱碱如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇（10 mg/ml）和DMSO（50 mg/ml）。

2）D-荧光素（钠盐）和D-荧光素（钾盐）能够非常容易且快速的溶入水或者缓冲液中，使用方便，溶剂无毒性，特别适合体内实验。配成溶液后的三种产品，在绝大多数应用上都没有实质性的差别。

3）D-荧光素（钠盐）和D-荧光素（钾盐）基本上没有差别，主要是使用习惯等因素影响。整体来看，钾盐的应用文献明显多于钠盐。

基本特性：

1）CAS NO：115144-35-9

2）化学名：4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid potassium salt,D-Luciferin firefly, potassium salt

3）分子式：C₁₁H₇N₂O₃S₂K

4）分子量：318.42 g/mol

5）纯度：＞99% (HPLC)，分子生物学级（超纯）

6）外观：浅黄色至黄色粉末

7）溶解性：溶于水（60 mg/ml）

保存条件: 

-20℃干燥避光储存，有效期2年。

产品使用：

A．体外生物发光检测

1）储存液制备

用蒸馏水溶解D-荧光素（钾盐），配制成15mg/ml的储存液（100×），混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。建议使用的工作液浓度为150µg/ml（相当于468µM）。

2）荧光素酶反应缓冲液制备

配方【1×，参考】：100mM Tris-HCl（pH 7.8），5mM MgCl₂，250µM CoA，150µM ATP。具体缓冲液组成可参考其他文献资料来调整。按照以上配方制备荧光素酶反应缓冲液（2×）。

3）收集细胞裂解上清（荧光素酶表达）

根据需要检测的细胞类型，选择合适的裂解液进行细胞裂解，离心收集上清后续检测待用。

4）萤火虫荧光信号检测

【注①】：萤火虫荧光信号的检测方法大体上取决于冷光测定仪（luminometer）类型（是手动型荧光计、单管注射型或者酶标板读数型荧光计）。根据特定发光测定仪，来考虑注射用量和程序设置。

【注②】：需设置不含荧光素酶的孔（用作阴性对照），以测定背景荧光。

例：注射式冷光测定仪（injectible luminometer，单样或微孔板，200µl终体积）

a）吸取100µl荧光素酶反应缓冲液（2×）到一干净的冷光测定仪比色皿或96孔板的各孔（最好使用全白平底的96孔板）；

b）吸取50~98µl裂解上清到皿或孔内；

c） 如果有需要，用水来补足使得总体积到198µl；

d）设置程序注射2µl荧光素储存液（使工作浓度150µg/ml），程序：2~5秒延迟（delay），之后10s测定。

B．活体成像分析

1）用无菌的PBS（w/o Mg²⁺）或者DPBS（w/o Mg²⁺）配制D-荧光素（钾盐）工作液（15mg/ml），0.2µm滤膜过滤除菌。混匀后立即使用或分装于-20℃或-80℃冻存，避免反复冻融。一旦使用，放到4℃解冻，保持冰冷且避光。

2）注射量取决于注射方式，具体如下：

3）注射入体内10-20 min（待光信号达到最强稳定平台期），再进行成像分析。

注：建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线，从而确定最高信号检测时间和信号平台期。

注意事项：

1.      本品要进行避光操作和保存。

2.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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