细胞膜荧光探针

DiIC12(3) perchlorate

【温馨提示】：见我司整理的细胞膜荧光探针（Tracers for Membrane Labeling）产品专题 。

产品简介：

橙红色荧光、亲脂性碳菁染料-DiIC12(3)，是DiI (DiIC18(3))（Cat#：NBS5129）的短链类似物，能比DiI更轻易插入细胞膜。在水中呈弱荧光，一旦插入膜后发强荧光且光相对稳定。脂质环境中具极其高消光系数和短激发态寿命（~1ns）。一旦加入细胞中，染料横向扩散进入质膜。DiIC₁₂(3)是一种亲脂性神经元示踪剂，通常用于标记神经元项目以及其它细胞（特别是内皮细胞）的脂质双分子层。

基本特性：

1） 同义名：DiI perchlorate; DiIC18(3);1,1′-Dioctadecyl-3,3,3′,3′-tetramethylindocarbocyanine perchlorate;

2） CAS NO：41085-99-8

3） 分子式：C59H97ClN2O4

4） 分子量：933.87 g/mol

5） 纯度：≥95%（TLC）
6） 溶解性：溶于DMF，DMSO，甲醇
7） 外观：红色至暗红色，紫色至深紫色粉末
8） Ex/Em：549/565 nm（in phosphate buffer/SDS pH 7.0）
9） 推荐滤光器：Omega- XF108, XF32, Chroma-41002, 31002

10）化学结构图：

保存条件: 

4ºC干燥避光保存，有效期一年。

产品使用：

【注意】以下使用方法仅用作参考，可根据具体的实验条件做出调整。

1.染色液制备

1）储存液制备：用DMSO或乙醇配置浓度1～5 mM的储存液。例如，取5mg DiI（Mw：933.87 g/mol）溶于1.07ml无水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融。

2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，调整到1～5 μM的工作浓度。【注意】工作液最终浓度需要根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度开始，以10倍范围为区间进行最优浓度的摸索。

2.悬浮细胞染色

1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×10⁶/ml。

2）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。

3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5min。

4）去除上清液，之后轻柔加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。

5）再重复3），4）步骤两次。

3.贴壁细胞染色

1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

2）从培养基中移走盖玻片，滤掉过量培养液，将盖玻片放在潮湿的小室内。

3）在盖玻片的一角加入100μL的染色工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

4）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。

5）吸掉染色工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸走培养基。

4.显微镜检测

1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiA滤光器的选择参见下表：

2）多色染料的同时检测，滤光器按照以下设定：

a)DiI和DiO＝OmegaXF52，Chroma51004；

b)DiI和DiD＝OmegaXF92，Chroma51007；

c)DiI，DiO和DiD＝OmegaXF93，Chroma61005；

5.流式细胞仪检测

经DiO，DiI，DiD和DiR染色的细胞分别用流式细胞仪的FL1，FL2，FL3或FL4通道检测。

注意事项：

1.      荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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