细胞膜荧光探针

DiA (4-Di-16-ASP)  

【温馨提示】：见我司整理的细胞膜荧光探针（Tracers for Membrane Labeling）产品专题 。

产品简介：

DiA为亲脂性氨基苯乙烯基染料（dialkylaminostyryl dye），扩散进入细胞膜（比DiO扩散速度快），常用于神经元的示踪。最显著的特点就是能与DiI（DiIC18(3)）联合使用进行双色标记。DiA能用于甲醛固定组织染色，研究发现某些情况下当DiO不能标记固定组织时，DiA可得到良好标记。DiA水溶液中的荧光非常弱，但与磷脂双层膜结合后，光谱迁移荧光明显加强。因其发射光谱非常广，可被绿色，橙色，甚至是红色滤片检测到。

本品以DiA的碘盐形式提供，英文名：4-(4-(Dihexadecylamino)styryl)-N-methylpyridinium iodide，纯度≥90%，适用于荧光检测研究。

基本特性：

1） 同义名：4-Di-16-ASP;4-(4-(Dihexadecylamino)styryl)-N-methylpyridinium iodide;

2） 分子式：C46H79IN2

3） 分子量：787.04g/mol

4） 外观：红色或橙色固体

5） 纯度：≥90%

6） Ex/Em：491/613nm（甲醇）

7） 溶解性：溶于乙醇，DMSO，甲醇

8） 推荐滤光器：Omega-XF21, Chroma-31024

9）化学结构图：

保存条件: 

-20ºC避光干燥保存，有效期一年。

产品使用：

【注意】以下使用方法仅用作参考，可根据具体的实验条件做出调整。

1. 染色液制备

1）储存液制备：用DMSO或乙醇配置浓度1～5 mM的储存液。例如，取25mg DiA（Mw：787.04g/mol）溶于6.35ml无水DMSO中，充分溶解，即得到5mM的储存液。【注意】未使用的储存液分装储存在-20℃，避免反复冻融，且要避光保存。

2）工作液制备：用合适的缓冲液（如：无血清培养基，HBSS或PBS）稀释储存液，调整到1～5 μM的工作浓度。【注意】工作液最终浓度需要根据不同细胞系和实验体系来优化。建议从推荐浓度开始，以10倍范围为区间进行最优浓度的摸索。

2. 悬浮细胞染色

1）加入适当体积的染色工作液重悬细胞，使其密度为1×10⁶/mL。

2）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。

3）孵育结束，按1000～1500 rpm离心5min。

4）去除上清液，之后轻柔加入37℃预热的生长培养液重悬细胞。

5）再重复3），4）步骤两次。

3. 贴壁细胞染色

1）将贴壁细胞培养于无菌盖玻片上。

2）从培养基中移走盖玻片，滤掉过量培养液，将盖玻片放在潮湿的小室内。

3）在盖玻片的一角加入100μL的染色工作液，轻轻晃动使染料均匀覆盖所有细胞。

4）37℃孵育细胞2～20min，不同的细胞最佳培养时间不同。可以20min作为起始孵育时间，之后优化以保证得到均一化的标记结果。

5）吸掉染色工作液，用培养液洗盖玻片2～3次，每次用预温的培养基覆盖所有细胞，孵育5～10min，然后吸走培养基。 

4、显微镜检测

1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiA滤光器的选择参见下表：

*滤光片编号是荧光显微镜检测的建议宽带滤片设置。

*DiR的荧光发射肉眼不可见，必须通过CCD摄像头或其他近红外敏感检测器检测。

注意事项：

1.      荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

相关产品：