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MagET™ IP/Co-IP Kit

产品介绍
MagET™ IP/Co-IP Kit是一款能够配合自动化核酸提取仪，完成免疫沉淀或免疫共沉淀的试剂盒。该试剂盒已经将磁珠、洗杂液等预先分装 入 Reagent Strips中，使用前只需去除封口膜，在样品孔中加入裂解好的样品，然后放入提取仪，选择预先设置好的程序，接下来免疫沉淀的 操作将由设备自动完成，大大节省了人工操作时间。
试剂盒包含高性能 rProtein A/G MagPoly Beads，能够实现快速便捷的磁性分离。另外试剂盒内经过优化的缓冲液，为免疫沉淀实验提供了 合适的反应条件，增强了免疫沉淀实验的稳定性。聚合物磁珠的配体是重组蛋白 A/G（约 14kDa），同时拥有蛋白A和蛋白G的 IgG结合结构域，具有更广的抗体亚型结合范围。
试剂盒的洗脱方式多样，既可以用低pH的洗脱液将免疫复合物从蛋白A/G磁珠上洗脱，也可以使用电泳上样缓冲液以变性条件洗脱免疫复合物，直接进行后续检测分析。
本产品可广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中抗原的免疫沉淀反应，具体组分见表 1、2

表1.MagET™ IP/Co-IP Kit产品组分

表2. MagET™ Reagent Strips组分

注意事项
1) 在进行免疫沉淀操作之前，请务必认真阅读此说明书。
2) 如果需要在还原条件下洗脱，向1X电泳上样缓冲液中加入DTT（终浓度 10-20mM）。
3) 经煮沸后的磁珠易聚集并且失去抗体结合能力，经煮沸的磁珠不应再次使用。
4) 为得到理想的实验结果，请选择特异性较强的抗体进行免疫沉淀反应。

5) 对于免疫沉淀实验，不同类型的抗体和抗原结合的亲和性是有区别的，抗体与抗原的结合还会受到影响，因此，若本试剂盒提供的缓冲体系 不能获得很好的实验结果，可自行优化缓冲液进行实验。
6) 实验设计时，建议加入对照组，以备后续实验结果分析。
7) 在确定实验结果前，建议保留各步骤抗原、抗体孵育后的样品以备验证。

使用流程
1 样品准备
方案I:贴壁细胞的裂解
1) 小心去除单层细胞的培养基。
2) 用预冷 PBS清洗细胞两次。
3) 根据表 3的推荐体积中加入预冷的 1×Lysis/Washing Buffer(Enhanced)。冰上孵育 5 min，期间混匀几次。
4) 将上述裂解好的样品转移至一个新的离心管中，13000×g离心 10 min，分离细胞碎片。
5) 将上清转移到一个新管中，进行蛋白浓度测定及后续实验，标记为细胞裂解样品。

表3.针对各种标准培养皿的1×Lysis/Washing Buffer(Enhanced)的推荐使用体积

方案II：悬浮培养细胞的裂解
1) 将细胞悬液以 1,000×g离心 5 min，收集细胞，弃上清。
2) 用预冷 PBS将细胞团轻轻重悬，将细胞悬液以 1,000×g离心 5 min，收集细胞，弃上清。
3) 向细胞团块中加入预冷 1×Lysis/Washing Buffer(Enhanced)。每 50 mg细胞团块使用 500 μL。
4) 将上述裂解好的样品在冰上孵育 5 min，期间混匀几次。13,000×g离心 10 min，去除细胞碎片。
5) 将上清转移到一个新管中，以备蛋白浓度测定及后续实验，标记为细胞裂解样品。

2 免疫沉淀

抗体推荐用量 2.5 µg，用 1×Lysis/Washing Buffer(Enhanced)稀释至 500 µL备用。

3 自动化免疫沉淀--MagET™ Smart 8

1) 取出 MagET™ Reagent Strips，颠倒混匀数次使磁珠重悬，使用前小心撕去铝箔封口膜，防止液体溅出。

2) 在 MagET™ Reagent Strips的第 2孔中加入 3.2预处理的 500 µL抗体稀释液，在第 4孔中加入 3.1预处理后的 500 µL细胞裂解样品。向 MagET™洗脱管中加入 100 µL Elution Buffe（r酸性洗脱）或 100 µL 1×电泳上样缓冲液（变性洗脱）。
3) 将 MagET™ Reagent Strips和 MagET™洗脱管置于 MagET™ Smart 8核酸提取仪底座上，然后将底座放入 MagET™ Smart 8核酸提取仪中。
4) 将 MagET™ 4孔磁棒套插入 MagET™ Smart 8核酸提取仪磁棒套架卡槽内。
5) 选择表 4或表 5对应的预设程序并运行，自动化程序结束后，取下 MagET™ 4孔磁棒套丢弃，取出 MagET™洗脱管。如果是酸性洗脱，立即向 MagET™洗脱管 Elution Buffer中加入 10-20 µL Neutralization Buffer。
6) 如果是变性洗脱，取出 MagET™洗脱管，100℃加热 10 min后，离心取上清，进行电泳。

 表4. MagET™ Smart 8核酸提取仪程序设定（低pH洗脱）

表5. MagET™ Smart 8核酸提取仪程序设定（变性洗脱）

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