Polyethylenimine Linear (PEI) MW25000

线性PEI转染试剂 MW25000

产品简介：

Polyethylenimine Linear（PEI）溶液是由一种阳离子聚合物转染试剂，结构可以写成是-(CH2CH2NH)n-，PEI 能将DNA包裹成带正电荷的微粒，这些微粒可以黏合到带有负电荷的细胞表面残基，并通过胞吞作用进入细胞。一旦进入细胞，胺的质子化导致反离子大量涌入以及渗透势降低，在低 pH环境中实现 DNA胞内释放。PEI上未质子化的胺可以在与膜结合的细胞器（如溶酶体）中吸收氢离子，这将导致更多氢离子的流入，诱发渗透溶胀。而质子化胺之间的排斥引起PEI构象的改变，上述变化导致的渗透膨胀使囊泡释放聚合物与DNA形成的复合物进入细胞质。复合物拆解后，DNA能自由的融合到细胞核中。

应用最广泛的主要有PEI 25000与 PEI 40000（也有称 PEIMAX），对大多数培养细胞都有较高的转染效率(用于常见细胞系，如HEK-293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO-K1、COS-1、COS-7、NIH/3T3 和 Sf9 等)，并且细胞毒性较低。。PEI 40000与PEI 25000 转染试剂相比，具有很多优点。两者区别: 1) PEI 25000转染溶液通常需要几个小时才能制备，PEI 25000含有 4-11%的残余丙酰基，可防止聚合物主链与DNA强烈结合。2) PEI 40000完全水解(完全去乙酰化的结构意味着每批产品的表现始终如)，可以在两个小时内转化为即用型溶液。3)PEI 40000 比PEI 25000更易于使用，并且更高效，含更长连续性乙烯亚胺片段，其质子化氮水平比PEI 25000提高11%以上。

本品是PEI 25K的无菌溶液，浓度为1mg/ml，直接使用即可。

保存条件：

粉末室温保存，2年有效。

溶液-20℃保存，1年有效。

产品使用（以6孔板为例）

1. 细胞铺板

提前一天将细胞种植在六孔板中，以转染时细胞密度在 70%~80%为宜。

2. 转染过程

1)     在转染前2h，移除细胞上原有的培养基，换为新鲜的完全培养基。

2)     将2ug质粒DNA用100uL无血清稀释液稀释，充分混匀制成DNA稀释液。

注意：无血清稀释液建议采用Opti-MEM或ddH2O。

3)     向DNA 稀释液中直接加入4uL转染试剂，室温静置10~15min。转染复合物配制完成。

4)     将转染复合物加入细胞培养基中，轻柔混匀。

5)     继续培养24~48h，收取细胞进行鉴定或加入相应抗生素筛选稳定克隆。

6)     使用本产品转染后一般在24h开始进入表达高峰期，36~48h达到表达高峰，相对于脂质体转染试剂，达到峰值的时间延后约6~12h。

不同细胞培养容器转染用量:

不同细胞系参考数据 （以 6 孔板为例）（数据仅供参考）

线性 PEI 溶液的配制方法:

下面分别推荐一种简单适用而高效的方法，讲述如何配制浓度为1mg/mL的转染试剂的配制。

提前准备器材:

1L玻璃烧杯、1L玻璃量筒、pH计、移液器、磁力搅拌棒、带油管的真空泵、1g的PEI 25000或者1g的 PEI 40000、IL 纯水(Milli-Q@纯水，注射用水(WFI)，或类似的生物级水)、1N 氢氧化钠、25mL 无菌塑料吸管、一次性 0.1μm, 0.2um, 0.22μm PES真空无菌过滤器、

无菌高聚乙烯或聚丙烯试剂瓶。

配制过程:

1g的PEI 25000→900mL水溶解→搅拌、加热（60-80°C）→加HCl调pH到2.0 左右→盖上烧杯，搅拌3h（直至粉末完全溶解）→冷却至室温→加NaOH调pH到6.9-7.1→移液到量筒，加水补足至1L→真空过滤消毒→分装，-20°C 保存。

1g的 PEI 40000→900mL水→溶解搅拌、加热(60-80°C)→加1N NaOH调pH到6.9-7.1→移液到量筒，加水补足至1L→真空过滤消毒→分装，4°C保存。

注意：加热或加酸都有助于PEI 溶解（特别是配制PEI 25000，只加热溶解不了，需要适当加酸的），详细用量可试加一点搅拌看看，足够溶解就行，不一定需要加到pH那么低。

转染液贮存和保存期:

分装存放在无菌高聚乙烯或聚丙烯试剂瓶中

PEI 25000溶液可在-20°C保存长达一年，部分解冻的溶液可在4°C 保存2周，不可反复冻融。

PEI 40000转染溶液在4°C可保持其性能至少6个月效果最佳，稳定存放此溶液可能适用一年。不可反复冻融。

注意事项：

1.      本品为无菌溶液，请操作过程中执行无菌操作。

2.      本产品对细胞非常温和，一般情况下转染后无需进行换液操作。

3.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅用于生命科学研究，不得用于医学诊断及其他用途！