线性PEI转染试剂 MW25000

Polyethylenimine Linear (PEI) MW25000

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产品简介：

线性聚乙烯亚胺（PEI 25000）是常用阳离子聚合物转染试剂，化学结构为‑(CH₂CH₂NH)ₙ‑。PEI可通过静电吸附包裹带负电DNA，形成带正电的纳米复合物，结合细胞膜表面负电基团后经胞吞进入细胞。在内体酸性环境中，PEI氨基发生质子化，改变细胞器渗透压，初步实现DNA释放。

PEI 25000依靠质子海绵效应实现高效内体逃逸：可持续捕获内体、溶酶体内的氢离子，引发离子内流造成细胞器渗透溶胀；同时质子化氨基的静电排斥改变PEI构象，促使囊泡破裂，将PEI‑DNA复合物释放至细胞质。复合物解离后，外源DNA可入核完成基因转录与表达。

PEI 25000分子量适中、电荷分布均衡，核酸结合能力与内体逃逸性能优异，批次稳定性好，适配细胞瞬时转染。相比高分子量PEI，其细胞毒性更低、兼容性更广；相比低分子量PEI，质子缓冲能力更强、转染效果更稳定，性价比高，是常规真核细胞转染的经典试剂。

本品分为粉末与无菌溶液两种剂型：粉末溶解性好，可快速配制为工作液，适合长期储存、按需使用；溶液剂型浓度为1 mg/mL，经无菌过滤除热源处理，开瓶即可使用，操作便捷。

本品毒性低、血清兼容性良好，可直接在含血清培养基中完成转染，无需换液，操作简便。对多种贴壁及悬浮细胞转染效率稳定，适用于HEK‑293、HEK293T、HepG2、Hela、CHO‑K1、COS‑1、COS‑7、NIH/3T3、Sf9等主流细胞系，可满足基因过表达、载体验证、蛋白制备等常规转染实验需求。如果您需要更高转染效率与蛋白表达量、严苛批次重复性的实验、病毒包装及稳定高产的制备级实验，建议选择我司产品 PEI 40000（货号NBS4000）。

保存条件：

粉末：室温保存（两年有效）

溶液：4℃保存（一年有效）

产品使用（以6孔板为例）

一、        贴壁细胞转染（以6孔板为例）：

1.     转染前准备

转染前一日接种细胞至6孔板，转染时细胞汇合度建议为 70%‑80%。常规细胞培养18–24 h后进行转染，Sf9细胞仅需培养3–4 h即可转染。转染前 2 h，弃去原有细胞培养基，更换新鲜完全培养基（普通细胞系亦可直接于原培养基中加入 PEI‑DNA 复合物进行转染）。

2.     DNA-PEI复合物制备

实验前将 DNA、PEI 转染试剂及稀释液恢复至室温。采用 Opti-MEM或其他适配的无血清培养基分别稀释质粒 DNA 与 PEI 试剂，配比标准为每 1 μg DNA 对应 3 μL 线性 PEI 转染试剂。轻柔涡旋 DNA 稀释液的同时，将稀释后的 PEI 试剂逐滴加入其中，严禁颠倒加样顺序。充分混匀后，室温静置 10–25 min，完成 DNA-PEI 复合物组装。若配制体系体积较大，建议使用5 mL、14 mL 等圆底聚丙烯离心管进行操作。

3.     细胞转染

将制备完成的DNA-PEI复合物逐孔加入培养体系中，轻柔晃动培养板/培养皿混匀。本品血清兼容性良好，常规细胞转染后无需强制换液。若细胞较为敏感或 PEI 用量偏高，哺乳动物细胞可在转染 4‑6 h 更换新鲜完全培养基；Sf9 细胞对 PEI 耐受性较低，建议转染 2 h 后更换生长培养基，减少游离 PEI 造成的细胞毒性。

4.     细胞孵育与结果检测

将细胞置于37 ℃ CO₂培养箱中持续孵育，待后续检测分析。本品转染后 24 h 起基因表达逐步升高，胞内蛋白一般 48‑72 h 达表达峰值，分泌型蛋白可于 72‑96 h 收获；相较于脂质体类转染试剂，表达峰值延后约 6‑12 h，最佳检测时间可根据实验需求自主优化确定。

5.     稳定细胞株筛选

转染 48‑72 h 后，将细胞按适宜比例稀释传代至新鲜生长培养基，置于 37 ℃ CO₂培养箱孵育过夜；次日加入与载体抗性基因匹配的筛选药物进行筛选。筛选期间定期更换含筛选药物的新鲜生长培养基，持续培养 1‑2 周可获得耐药细胞混合池；若需获得单克隆细胞，还需进一步采用有限稀释法等开展单克隆分选。

注：①筛选前必须完成药物杀伤曲线测定，确定最佳筛选浓度；②PEI25000 转染后细胞可能存在短暂毒性应激，待细胞状态恢复后再启动药物筛选；③不要在转染后过早施加筛选压力，避免杀死尚未完成基因组整合的阳性细胞。

二、        悬浮细胞转染：

1.     转染前准备

将悬浮细胞传代接种至适量悬浮细胞完全培养基中，置于适宜条件培养。根据培养容器规格调整细胞密度（以 100 mL 培养瓶为例，接种密度为 1×10⁶ cells/mL），旋紧瓶盖后放入摇床继续培养，静置 2–4 h 后即可开展转染操作。

2.     DNA-PEI 复合物制备

实验前将 DNA、PEI 转染试剂及稀释液恢复至室温。采用 Opti-MEM或其他适配的无血清培养基分别稀释质粒 DNA 与 PEI 试剂，配比标准为每 1 μg DNA 对应 3 μL 线性 PEI 转染试剂。轻柔涡旋 DNA 稀释液的同时，将稀释后的 PEI 试剂逐滴加入其中，严禁颠倒加样顺序。充分混匀后，室温静置 10–25 min，完成 DNA-PEI 复合物组装。若配制体系体积较大，建议使用5 mL、14 mL 等圆底聚丙烯离心管进行操作。

3.     细胞转染

将制备好的 DNA-PEI 复合物逐滴加入细胞培养液中，轻轻摇匀，旋紧培养瓶瓶盖，放回摇床，在适宜条件下继续培养，待后续检测分析。

4.     细胞孵育与结果检测

转染后 24–72 h 可检测目的基因表达，具体最佳检测时间可根据实验需求自行优化确定。

5.     蛋白高产优化方案

若需提升蛋白表达产量，可参考文献优化方案：转染 24 h 后对细胞进行适度稀释，稀释比例控制在 1:2–1:5。最佳稀释倍数及增产效果需结合具体细胞状态与实验条件摸索确定。

表1 不同细胞培养容器转染用量:

表2 不同细胞系参考数据 （以6孔板为例）：

三、        线性 PEI 溶液的配制方法：

1.     自备仪器及耗材：

1 L 玻璃烧杯、1 L 玻璃量筒、pH 计、移液器、磁力搅拌子、带油管真空泵；1 L 生物级纯水（Milli-Q 纯水、注射用水 WFI 或同等规格纯水）、1 N 氢氧化钠溶液、25 mL 无菌塑料吸管、0.1 μm、0.2 μm、0.22 μm PES 真空无菌滤器、无菌高密度聚乙烯 / 聚丙烯试剂瓶。

2.     配制过程:

称取 1 g PEI 25000，加入 900 mL 纯水，搅拌混匀，单纯加热难以实现充分溶解，需辅以弱酸调节配合 60–80 ℃加热协同助溶；待粉末完全澄清溶解后，冷却至室温，使用 1 N NaOH 溶液调节 pH 至 6.9–7.1。将溶液转移至量筒，补加纯水定容至 1 L，经真空过滤除菌后分装，置于 4 ℃条件保存。

注：加热或弱酸调节均可促进 PEI 溶解。尤其 PEI 25000 仅靠加热难以充分溶解，需辅以少量弱酸调节。实际配制时可少量试加、边加边搅拌，以物料完全溶解为准，无需过度调节酸碱度。

注意事项：

1.     本品溶液剂型为无菌制剂，实验操作全过程需严格遵守无菌操作规范，避免污染。

2.     本品不建议冷冻保存，以免影响试剂活性与转染效果。

3.     本品不适用于单链RNA转染实验。

4.     针对绝大多数细胞系，每1 μg质粒DNA搭配3 μL PEI 25000转染试剂，即可获得理想的转染效率；用户可根据自身细胞特性，在1.5–4 μL/μg DNA范围内优化最佳试剂用量。

5.     细胞转染过程中细胞膜通透性会显著提升，培养基中的抗生素易进入胞内造成细胞损伤，进而影响细胞状态与转染效率。因此，制备转染复合物前，建议将培养基更换为不含抗生素的完全培养基。

6.     为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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本产品仅用于生命科学研究，不得用于医学诊断及其他用途！

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