5-Ethynyl-2'-deoxyuridine (EdU) 5-乙炔基-2’-脱氧尿苷
货号:NBS4211-50MG,NBS4211-250MG
品牌:NoninBio
产品描述
EdU,英文全称5-Ethynyl-2'-deoxyuridine,中文全称5-乙炔基-2’-脱氧尿苷,是BrdU(5-溴-2’-脱氧尿苷)的新型替代物,可直接检测活跃的DNA合成或细胞周期的S期合成。作为胸苷的核苷类似物,可插入细胞培养物或动物体内处于活跃合成期的细胞DNA,无明显毒性。EdU的检测基于高效的点击化学反应(click reaction),是由I价铜离子催化的叠氮化物和炔烃化合物之间的反应过程。EdU含有炔烃基,可与含叠氮基团的荧光探针反应形成稳定的三唑环。
借EdU的点击反应进行DNA检测的优势是非常显而易见的。含叠氮基团荧光探针的小分子量使得EdU能在温和条件插入DNA,这相反于BrdU为基础的反应,后者需要DNA变性(通常使用HCl,加热或DNase消化)促使BrdU暴露,从而被抗BrdU抗体检测到。因此,少了变性步骤的EdU反应流程快键方便,可得到高重复性的结果,并且能轻易的与相关抗体检测靶标包括磷酸化H3、Ki67、周期蛋白cyclin B1等进行多重分析,通过流式细胞仪、荧光显微镜或高通量成像仪(HCS)来检测。
产品特性
1)CAS NO:61135-33-9
2)同义名:2'-deoxy-5-ethynyl-uridine2’-脱氧-5-乙炔基-尿苷, 2'-deoxy-5-Ethynyluridine, 5-EdU,EdU
3)分子式:C11H12N2O5
4)分子量:252.23 g/mol
5)纯度:≥98% (HPLC)
6)外观:白色至类白色固体
7)溶解性:溶于DMSO(20mg/ml),无水乙醇(~25mg/ml),PBS, pH 7.2(~10 mg/ml)
8)化学结构:
保存与运输方法
保存:-20°C干燥保存,至少2年有效。
运输:冰袋运输。
常见问题(FAQs)
1. 是否任何细胞型都能插入EdU?
答:不是。细胞必须含嘧啶核苷酸补救合成途径(pyrimidine salvage pathway),没有该途径,EdU不能被磷酸化进而不能插入复制中的DNA。
2. EdU储存液如何制备?
答:体外细胞实验,取适量EdU(Mw:252.23)溶于DMSO或生理缓冲液配制10mM母液,按单次用量分装,置于≤-20°C冻存,1年稳定。
3. 如何进行EdU标记?
起始实验建议测试一系列EdU浓度来确定最佳浓度。如果目前有进行基于BrdU的标记实验,可选择相似的浓度和标记时间作为起始EdU标记条件。更低量的EdU可能达到同BrdU的标记效果,最优浓度根据标记时间有所变化,原则上浓度越低,标记时间越长。
对于细胞培养物——哺乳动物和植物细胞用0.1–10 µM EdU孵育0.5-3h能达到相对理想的标记;
对于活体动物——根据注射方式、给药次数和检测位置有所变化。参考相应文献进行优化调整。
4. 如何进行EdU检测?
使用含叠氮基团的荧光探针如TAMRA azide,Alexa Fluor azide(包括Alexa fluor 488, 555, 594, 647)等,在含有CuSO4的染色反应液中进行荧光染色。或者直接使用我司提供的EdU增殖检测试剂盒(成像或流式检测),含有所有检测组分,使用方便。
注意事项
1)EdU是一种能插入DNA的核苷类似物,操作过程一定要注意防护,不要与皮肤直接接触。另需戴口罩避免粉尘吸入。
2)为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。