EZ poly-3000TM转染试剂
产品目录 | EZ poly-3000TM | Enhancer(增强剂) | 存储温度 |
NBS4925-0.75mL | 0.75mL | 0.75mL | 4℃ |
NBS4925-1.5mL | 1.5mL | 1.5mL | 4℃ |
产品介绍
EZ poly-3000TM转染试剂是一种基于脂质体作为体内和体外输送载体的工具,通过包裹DNA或RNA形成复合物,并导入到各种不同类型的贴壁和悬浮细胞内。EZ poly-3000TM转染试剂提供了出色的转染性能,在面对各种难转染的细胞同样保持高效率的转染效果,以及提高了细胞存活率。EZ poly-3000TM转染试剂经过与Lipofectamine@3000同比测试具有一样出众的转染效果,同样适用于针对血清原代细胞进行DNA和RNA转染。
产品特点
·优越的转染效率-适用于广泛类型的细胞,包括难转染细胞。
·抗干扰出色-无需移除细胞培养物中的血清和培养基。
·使用方便-转染后无需清洗或更换培养基。
·细胞毒性低-作用温和,对细胞友好。
操作说明
请使用下面步骤在24孔培养板进行DNA转染到哺乳动物细胞。其他类型培养板的使用,请查阅说明书中提供的“转染稀释比例参考”,提供了对应培养板的参考用量。如仍需进一步优化,请参阅说明书中提供的“优化转染参考”。
1.贴壁细胞:转染前一天,将0.5-2x105细胞置于500μl不含抗生素的生长培养基中,使转染时接种细胞达到70-90%的汇合度。
悬浮细胞:加入DNA-脂质体复合物之前,将4-8x105细胞置于500μl不含抗生素的生长培养基中。
2.对于每个转染样品,制备DNA-脂质体复合物如下:
a. 使用25μl Opti MEM@培养基稀释1μl EZ poly-3000TM(组分A), 充分混匀,室温下待用。
b. 使用25μl Opti MEM@培养基(培养基不含血清)稀释0.5μg DNA,然后添加1μl增强剂试剂(Enhancer成分B)。充分混匀,制备成DNA/增强子混合物,室温下待用。
c. 把DNA/增强子混合物加入到制备好的EZ poly-3000TM中(总体积=50μl)。轻轻充分混匀,在室温下培养10-15分钟。
3. 加入50μl DNA-脂质体混合物到培养板每孔的细胞中,轻轻充分混匀。
4. 在培养箱37℃孵育24天。然后分析转染细胞。如有需要,4-6小时后更换培养基。
优化转染参考
为了获得最高的转染效率和低细胞毒性,通过改变细胞密度以及DNA和EZ poly-3000TM来优化转染条件试剂浓度。确保细胞汇合率大于90%,并改变DNA(μg): EZ poly-3000TM试剂(μl):增强剂试剂(μl)比例为1:1:2至1:4:2。
转染稀释比例参考
要以不同的组织培养形式转染细胞,请改变EZ poly-3000TM试剂、增强剂试剂(Enhancer)、核酸、细胞和培养基的用量按相对表面积的比例使用,如表所示。
Culture Plates | Surface Area (cm²) | Plating Medium | Dilution Medium Volume | DNA Transfection | siRNA Transfection | |||
DNA | EZ poly-3000 Reagent | Enhancer | siRNA | EZ poly-3000 Reagent | ||||
96-well | 0.3 | 100μl | 2x5μl | 0.1μg | 0.15-0.3μl | 0.2μl | 3 pmol | 0.3μl |
24-well | 2 | 500μl | 2x25μl | 0.5μg | 0.75-1.5μl | 1μl | 15 pmol | 1.5μl |
12-well | 4 | 1ml | 2x50μl | 1.0μg | 1.5-3.0μl | 2μl | 30 pmol | 3.0μl |
6-well | 10 | 2mL | 2x125μl | 2.5μg | 3.75-7.5μl | 5μl | 75 pmol | 7.5μl |
