7-Azido-4-methylcoumarin (AzMC)

硫化氢荧光探针

产品简介：

7-Azido-4-methylcoumarin (AzMC)是一种用于硫化氢（H2S）检测的香豆素荧光探针。在含H2S的体系内，该化合物上的芳香叠氮功能基团被还原生成7-氨基-4-甲基香豆素（AMC），伴随着在λex = 365 nm和λem = 450 nm处的荧光增强。AzMC既可用于体外监测H2S的酶促生成，也可用于观察活细胞中的H2S。AzMC对H2S具高度的灵敏度和选择性，体外AzMC（10μM）可用于200nM-100μM范围内的H2S检测。在含mM浓度的半胱氨酸、同型半胱氨酸、谷胱甘肽和多种其他常见的生物分析物的存在下选择性地与H2S进行反应。AzMC可用作鉴定新型胱硫醚β合成酶（CBS）抑制剂和激活剂的一款工具。AzMC可用于监测PLP依赖的酶活性（比如：胱硫醚β合成酶（CBS）、胱硫醚γ-裂解酶（CSE）、色氨酸合酶（TS））。适用于高通量筛选。

产品特性：

1）  CAS NO：95633-27-5

2）  化学名：7-azido-4-methyl-2H-1-benzopyran-2-one

3）  分子式：C₁₀H₇N₃O₂

4）  分子量：201.2

5）  外观：白色至黄色固体

6）  纯度：≥95%

7）  溶解性：溶于DMSO

保存条件: 

-20ºC避光干燥保存，至少2年有效。 

产品使用：

1、 储存液制备

将低温保存的产品从冰箱取出，置于室温回温至少20min。低速离心3-5min。之后往瓶内加入适量无水DMSO充分溶解配成10mM储存液（比如，1mgAzMC（Mw: 201.2）加入497μl DMSO）。按照单次用量分装避光冻存，避免反复冻融，至少3个月稳定。

2、 工作浓度

正式实验前，取10mM储存液用适当缓冲液或培养基稀释到所需工作浓度即可。具体的工作浓度请参考文献或根据自身实验需求来进行优化调整。参考下方一些实验数据，来自公开文献，仅作参考。

应用示例1：使用AzMC来测定体外重组人CBS催化H2S生成水平。96孔板中，酶反应缓冲液体积为180μl，包含：200 mM Tris-HCl pH 8.0, 5 µM吡哆醛-5-磷酸酯（PLP），10 mM谷胱甘肽和0.5 mg/ml BSA。AOAA或 YD0171加入10μl。CBS（5 µg/孔）按照10μl体积加。AzMC（10 µM）和CBS底物L-半胱氨酸和高半胱氨酸（终浓度2.5mM）按照10μl体积加，最终总的反应体系是200μl。37℃孵育1h，之后测定450nm下的荧光值（λex = 365 nm）。

【文献来源：Chao, C., Zatarain, J.R., Ding, Y. et al. Cystathionine-β-Synthase Inhibition for Colon Cancer: Enhancement of the Efficacy of Aminooxyacetic Acid via the Prodrug Approach. Mol Med 22, 361–379 (2016). 】

应用示例2：使用AzMC测定猪气管上皮细胞的胞内H2S生成。气管组织圆片（6.9mm直径）用锋利的不锈钢打孔器制备，之后放到缓冲液中（含20 µM AzMC）。在圆周振荡器上室温避光孵育1h，之后转移到96孔板（7.0mm孔径），并加入100µl相同的反应缓冲液覆盖组织。于荧光酶标仪测定荧光值（激发和发射波长分别是365nm和450nm）。

【文献来源：Krause NC, Kutsche HS, Santangelo F, DeLeon ER, Dittrich NP, Olson KR, Althaus M. Hydrogen sulfide contributes to hypoxic inhibition of airway transepithelial sodium absorption. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2016 Sep 1;311(3):R607-17. Epub 2016 Jul 20. PMID: 27440715.】

应用示例3：使用AzMC来测定RAECs细胞中的H2S生成。RAECs 细胞用50μM AzMC（PBS）孵育30min，之后用PBS清洗3次。之后在荧光显微镜下观察H2S与AzMC反应后产生的荧光信号。

Fig 1.H2S content and the level of CSE were decreased under hyperglycaemia and hyperlipidaemia states. (A) RAECs were treated with 40 mM glucose, 200 μM palmitate, 100 μM NaHS and 2 μM Mito-Tempo for 48 hrs, and the H2S level were detected. The fluorescence of H2S was observed by fluorescence microscope, and the nuclei were pointed out by the arrow. (n = 4, **P < 0.01 versus control group. ##P < 0.01 versus HG+Pal group). (B) The CSE level of RAECs was tested by Western blotting. (n > 5, *P < 0.05 versus control group, #P < 0.05 versus HG+Pal group).

注意事项：

1.       整个染色过程中需注意避光。

2.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。