外泌体荧光染料(DiR)
产品编号 | 产品名称 | 包装规格 |
NW3201 | 外泌体荧光染料(DiR) | 200 μL(1mM) |
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产品简介:
DiR是一种亲脂性的近红外荧光花青染料。其两个18-碳链可以与细胞膜或亲脂性生物分子结合,从而进行特定、稳定的染色。DiR所发射的红外光可以高效地穿过细胞和组织,所以常用于活体成像和示踪。
产品特性:
1. 分子式:C63 H101 IN2
2. 分子量:1013.4
3. 溶剂:DMSO
4. λex/λem(MeOH) = 748/780 nm
保存条件:
-20℃避光保存,1年有效。
产品使用:
一、 染料工作液制备
将“外泌体荧光标记染料(DiR)”用1×PBS稀释10 倍,配制成浓度为100 μM的染料工作液。
二、 外泌体染色
1. 在外泌体悬液中加入染料工作液,建议染料终浓度为 10~20 μM(按照终体积的1/5~1/10加入100 μM的染 料工作液);
2. 加入染料工作液后将离心管盖紧,通过涡旋振荡器混匀 1 min,再放置于37℃孵育30 min;
3. 向孵育后的外泌体-染料复合物中加入10 mL的1×PBS 混匀;
4. 按照外泌体提取方法再次提取外泌体以去除游离染料;
5. 取200 μL 1×PBS重悬沉淀物,即为染色后的外泌体。
注意事项:
1. 荧光染料均存在淬灭问题,请注意避光,以减缓荧光淬灭。
2. 染料工作液应现配现用,不能提前配制,否则将影响染色效果。
3. DiR染色固定细胞或组织样品时,样品宜使用4%多聚甲醛进行固定,使用其它不适当的固定液会导致荧光背景较高。
4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
常见问题:
1. 活体成像对外泌体浓度要求较高,建议用于染料标记的外泌体原始浓度达到0.5~1.5 μg/μL,外泌体浓度过低实验失败风险较高。
2. 外泌体染色步骤中去除游离染料的第3、4步必不可少,以避免游离染料对后期实验的干扰。这一步相当于重新提取外泌体,所有外泌体提取纯化方式都适用。
3. DiR碘化物(DiR染料)的发射波长肉眼不可见,需要使用配备CCD镜头或其他设备的近红外检测仪器,建议使用活体成像仪。
4. 建议染料标记的外泌体在注射后24 h内设置梯度时间 进行观测,多数情况下,在注射后2~8 h荧光强度达到峰值。为保证观察结果,小动物需要做剃毛处理。
5. 由于以下两个原因,建议制备2倍于活体成像或示踪实验所需外泌体量以进行染料标记:1)外泌体染色效率难 以达到100%;2)在去游离染料过程中无法避免外泌体的损失。
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