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  • 胶原酶(Collagenase,CAS NO. 9001-12-1)是一种蛋白水解酶,常用来消化细胞外基质蛋白。作为一种肽链内切酶,胶原酶特异性识别Pro-X-Gly-Pro序列(高频出现在胶原collagen,很少在其他蛋白中发现)并切割氨基酸(X)和甘氨酸(Gly)之间的肽键。不同于其他蛋白酶,胶原酶是唯一一种可识别并降解具三股超螺旋结构的天然胶原纤维,这种胶原纤维广泛存在结缔组织。
  • 透明质酸酶(Hyaluronidase)是一类能够降低体内透明质酸活性的酶的总称,一种糖蛋白,能随机裂解透明质酸,软骨素和硫酸软骨素中的β-N-乙酰己糖胺-[1→4]糖苷键。常与粗制蛋白酶,如胶原酶Collagenase,联合使用于组织中分离活细胞。 本品来源于羊睾丸(sheep testes),以冻干粉形式提供,比活力为≥300units/mg solid。
  • 胶原酶(Collagenase,CAS NO. 9001-12-1)是一种蛋白水解酶,常用来消化细胞外基质蛋白。作为一种肽链内切酶,胶原酶特异性识别Pro-X-Gly-Pro序列(高频出现在胶原collagen,很少在其他蛋白中发现)并切割氨基酸(X)和甘氨酸(Gly)之间的肽键。不同于其他蛋白酶,胶原酶是唯一一种可识别并降解具三股超螺旋结构的天然胶原纤维,这种胶原纤维广泛存在结缔组织。
  • 雷帕霉素(Rapamycin),也称西罗莫司(Sirolimus),AY 22989,一种分离自细菌的大环内酯化合物,抗真菌剂和免疫抑制剂。雷帕霉素是一种特异性的mTOR抑制剂,IC50为~0.1nM(HEK293细胞)。与细胞内受体FKBP-12结合形成复合物,之后作用于mTOR中的FRB结构域从而抑制蛋白活性。雷帕霉素处理细胞引起p70 S6激酶的去磷酸化和功能失活(IC50= 50 pM)。还能引起4E-BP1/PHAS1去磷酸化,进而促使其结合并失活eIF4E。雷帕霉素能够阻断蛋白合成和诱导细胞周期停滞在G1期。还能诱导酵母和哺乳动物细胞的自吞噬现象。能驱使人多能干细胞(hPSC)分化成中内胚层和血液祖细胞。
  • 二烯丙基三硫(Diallyl Trisulfide, DATS)是一种大蒜中发现的有机多硫化物,用作一种天然的硫化氢(H2S)供体。DATS能够减少前列腺癌细胞PC-3的存活率(IC50=22 μM)和抑制人结肠腺癌细胞HCT15的生长(IC50=11.5μM)。体内,DATS阻抑前列腺癌PC-3细胞裸鼠移植瘤生长,诱导血管平滑肌松弛。
  • 细胞内pH在众多细胞事件,包括细胞增长、钙离子调控、酶活性、受体介导的信号转导、离子运输、内吞、趋化、细胞粘附和其他细胞过程,都发挥重要的调节作用。近几年,pH敏感探针广泛用来检测胞内pH变化,使用pH荧光探针的成像技术也让研究人员以更好的空间分辨率和采样密度来调查这些生理过程,相比较于其他技术比如微电极。其中,BCECF(2′,7′-Bis(2-carboxyethyl)-5(6)-carboxyfluorescein)是最受欢迎的pH探针,能比率型检测细胞pH。然而,所有商业化的BCECF至少是由三种异构体构成的一种复合物,不同异构体之间的比率因批次而异,使得BCECF的应用变得复杂,且结果批次一致性难以控制。而,BCFL是单一异构体,开发出来就是为了克服BCECF的这一缺陷,显示出更优秀的结果重复性。
  • BCFL AM是一种细胞膜渗透性的荧光探针,用来测定相对的胞内pH变化。是常用的比率型pH探针-BCECF(2',7'-Bis-(2-Carboxyethyl)-5-(and-6)- Carboxyfluorescein)的优越替代物。与BCECF不同(至少由三种异构体构成的一种复合物,不同异构体之间的比率因批次而异),BCFL是单一异构体,具有更优秀的结果重复性。BCFL具有与BCECF相同的光谱反应(单波长测定λex/λem=490/535nm;或比率测定λex/λem=505/ 535nm和λex/λem=430/535nm)(光谱特征见附录I)。BCFL AM表现出pH依赖的双激发性,pKa~7.0,以及一个激发交点(454nm)。BCFL AM的比率型成像使得胞内pH测定基本不受几种可变因素的影响,包括染料浓度、光径、细胞泄露和光漂白率。
  • 细胞内pH在许多细胞事件起着重要的调节作用,这些事件包括细胞生长、钙调节、酶活力、受体介导的信号转导、离子转运、内吞、趋化性、细胞黏附和其他细胞进程。pH敏感的荧光探针普遍用来监测胞内pH变化。使用pH荧光探针的成像技术允许研究人员以更高的空间分辨率调研这些事件,采样密度可通过其他技术比如微电极来完成。 BCECF(2′,7′-Bis(2-carboxyethyl)-5(6)-carboxyfluorescein)是最受欢迎的一种pH探针,用来检测细胞pH。BCECF能非常理想的测定pH 7左右±1 pH单位内的数值变化,因其是一种双激发比率型pH探针,pKa~6.98(接近生理pH)。BCECF的激发光谱随着pH变化发生微弱的变化,而最大发射波长保持不变。BCECF的pH测定通过定量pH依赖性的发射光强度比率(Ex=535nm),分别用~490nm激发光激发和~440nm激发光激发(等消光点)。BCECF acid不具细胞膜渗透性,可通过微注射或划痕标记的方式加载。
  • BCECF, AM是一种广泛使用的检测细胞质pH值的荧光探针。具有细胞膜渗透性,进入细胞后被胞内酯酶水解生成BCECF,一种极性荧光衍生物从而被保留在细胞内。BCECF在细胞内很稳定,排出半衰期超过2小时。胞内pH测定通过比率成像实现,通过确定pH依赖性的发射光强度比率(Ex=535nm),分别用490nm激发光激发和440nm激发光激发,使用荧光分光光度法(spectrofluorometry)或流式细胞仪检测皆可。 BCECF,AM虽然主要用于哺乳动物细胞,也有报道用于植物细胞、细菌和酵母等的细胞pH水平检测。BCECF, AM还被广泛用于各种功能实验,如细胞活力和毒性、凋亡、粘附、趋化、药物抗性等引起的细胞pH变化检测。BCECF, AM还能用于包括钾离子在内的其他离子的胞内变化检测。
  • CoroNa Green, AM是一种具细胞膜渗透性的钠离子(Na+)指示探针。一旦进入细胞后,经非特异性酯酶水解生成不具有膜渗透性的CoroNa Green,一旦与Na+结合,绿色荧光明显增强,但波长发生很少变化。与其他Na+指示探针SBFI(货号:NBS7676)和ENG-2(货号:NBS7677、货号:NBS7678)一样,当存在生理浓度的其他单价阳离子时,CoroNa Green允许从时间和空间上来选择性分辨Na+浓度的变化。分子量更小的CoroNa Green(586),相比较于其他大分子量的Na+指示探针ENG-2(1087),在同等条件下,其膜渗透性的衍生物能更好的加载进入胞内。CoroNa Green能响应更广泛的Na+浓度范围(见附图II),Kd~80mM。不同于传统的SBFI,与Na+结合后的CoroNa Green的最大吸收和发射波长分别是492nm和516nm,因此,兼容于任何能检测荧光素(Fluorescein)的仪器,包括:流式细胞仪、荧光显微镜、共聚焦显微镜、荧光酶标仪和荧光光度计。CoroNa Green是一款有价值的工具,用来分析细胞外和细胞内的钠离子水平。