Western 10×BN转膜缓冲液（粉末）

产品简介：

Western 10×BN转膜缓冲液（Western 10× Blue Native Transfer Buffer）适用于BN蛋白电泳后凝胶上非变性蛋白的转膜。本转膜液配制便捷，稀释后无需调节pH值，pH约为7.5-7.7。该缓冲液最终可配成10L即用型1×缓冲液（根据需求补加甲醇）。

保存条件: 

室温保存，2年有效；配成10×转膜缓冲液后2-8℃贮存，1年有效；

加入甲醇的即用型转膜缓冲液2-8℃贮存，1个月有效。

配制方法：

产品使用：

1. 电泳后凝胶预处理（可选步骤）：

凝胶浸泡于适量1×即用型BN转膜缓冲液（加终浓度0.1% SDS）中，摇床慢摇10分钟。

注：凝胶浸泡在含SDS缓冲液中，能让蛋白带上更多的负电荷，有利于蛋白的转膜。

2. 转膜：

2.1 转膜方法：BN电泳后的转膜建议用湿转法；

2.2 膜的选择：BN电泳转膜必须使用PVDF膜，不能用NC膜（NC膜会与考马斯亮蓝G-250不可逆结合，很难清除干净）。根据蛋白大小选择膜的孔径。一般说来，大于20kDa蛋白选择0.45μm孔径，低于20kDa选择0.22μm孔径。PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿活化；

2.3 三明治结构：转膜三明治结构与传统转膜相同，即根据“黑胶白膜”制作三明治，即膜置于转膜夹芯正极一侧，凝胶置于转膜夹芯负极一侧，这样凝胶上带负电荷的蛋白才能转移到膜上；

蛋白转膜三明治制作：

负极（电转夹黑色面）—海绵垫—1层1mm厚度滤纸—凝胶—PVDF膜—1层1mm厚度滤纸—海绵垫—正极（电转夹白色面）。

2.4 转膜条件：由于在非变性条件下，不同蛋白的空间结构，聚合状态，电荷数量都有不同，以下转膜条件仅供参考，客户针对自己的目的蛋白，最好经过1-2次预实验后，确定最佳的转膜条件；

3. 洗膜：

PVDF膜用无水甲醇清洗10分钟，彻底去除蓝色G-250；

4. 进行后续WB操作：

封闭 — 一抗 — 二抗 — 检测。

注意事项：

1.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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