HRP-Anti Mouse Fab Nanobody for IP

产品简介：

免疫共沉淀是以抗体和抗原特异性结合为基础，用于研究蛋白与蛋白相互作用的经典方法，具体步骤是抗体与目的蛋白结合后，再与ProteinA/G填料或者磁珠孵育，进而分离得到ProteinA/G填料-抗体-目的蛋白复合物，最后通过WB实验检测蛋白之间是否存在互作。

在免疫共沉淀实验中会涉及到两种一抗：IP抗体和WB抗体，有时候IP抗体和WB抗体会来自同一种属，后续使用常规酶标二抗进行WB检测时，IP抗体的重轻链同样会被检测出来（重链55KDa，轻链25KDa），如果目的蛋白大小正好在重轻链附近，会对实验结果产生干扰，同时IP抗体使用量比较大，曝光后信号非常强，也会掩盖目的蛋白的信号。

HRP-Anti Mouse Fab Nanobody for IP是一款针对鼠源一抗的纳米二抗，和传统抗鼠二抗相比，其最大的区别在于只识别天然构象的一抗，不识别变性后的一抗，有效的避免了轻重链的干扰，让WB实验背景更干净、IP实验检测更准确，同时HRP-Anti Mouse Fab Nanobody for IP直接标记有HRP，让实验更快、更简单。

基本信息：

1.      抗体来源：重组抗体

2.      交叉反应：鼠Fab区

3.      克隆类型：纳米抗体

4.      偶联物：辣根过氧化物酶 (HRP)

5.      储存缓冲液：1×PBS (pH7.4) ，0.05% proclin300，50%甘油

保存条件: 

-20℃保存，2年有效，避免反复冻融。

产品使用：

ELISA=1:3000-1:5000

WB=1:1000-1:3000

注意事项：

1.      本产品为HRP直接标记的抗体，建议分装后于-20℃或-80℃避光保存，避免反复冻融。

2.      本产品灵敏度较高，进行Western Blot实验时请严格参考说明书中推荐的稀释比例进行使用，以免因浓度过高导致非特异性条带。

3.      实验过程中，请确保PVDF膜在转膜前经甲醇充分激活；转膜后，抗体孵育液应完全覆盖膜表面，避免局部干涸；同时，在转膜及抗体孵 育步骤中需注意排除气泡，以确保信号均匀与结果可靠。

4.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

实验结果：

1. 传统二抗和纳米二抗的WB结果

1)     蛋白信息：Mouse IgG，HC≈55KDa，LC≈25KDa；

2)     电泳条件：Mouse IgG加入变性loading后99℃加热10min，上样量为50ng；

3)     抗体孵育条件：37℃摇晃孵育60min；

4)     二抗信息：传统二抗（羊抗鼠IgG-HRP，1：10000），纳米二抗（HRP-Anti Mouse Fab Nanobody for IP，1：1000）；

5)     显色：ECL进行显色；

6)     结果：

图1结果表明，传统二抗能够识别变性一抗，而HRP-Anti Mouse Fab Nanobody for IP不识别变性后的小鼠一抗。

2. HRP-Anti Mouse Fab Nanobody for IP WB结果

1)     蛋白信息：Mouse IgG，HC≈55KDa，LC≈25KDa；

2)     电泳条件：还原Mouse IgG加入还原loading，99℃加热10min，非还原Mouse IgG加入非还原loading；

3)     抗体孵育条件：37℃摇晃孵育 60min；

4)     HRP-Anti Mouse Fab Nanobody for IP稀释比值1：1000和1：3000；

5)     显色：ECL进行显色；

6)     结果：

图2结果表明，HRP-Anti Mouse Fab Nanobody for IP不识别还原（变性）状态下的小鼠IgG，只识别非还原状态下的小鼠IgG，并且效价高，背景干净，条带单一。

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