总 RNA 极速抽提试剂盒

Ultra-Fast Total RNA Extraction Kit
 

→    产品咨询订购请点这里    ←

产品简介：

总 RNA 极速抽提试剂盒可实现快速、简便的总 RNA 分离纯化，提取全过程仅需 7–10 分钟；方案摒弃酚‑氯仿等有毒试剂，产品支持常温储存。试剂盒提取所得 RNA 品质与 Trizol 法相当，操作体系稳定性更佳，有效减少 RNA 损失，批次间差异小，可显著降低 DNA 与蛋白污染风险。产物 RNA 完整性佳、纯度高、得率优异，能够满足各类下游实验需求。试剂盒适用样本范围广泛，可用于动物组织、细胞、细菌、植物组织的总 RNA 提取，亦可直接处理血清、血浆及其他体液样本。全套试剂与耗材均经过除 RNase 处理，生产流程严格执行 RNase 防控标准。

保存条件: 

室温保存（两年有效）

产品组成：

注：*仅提取细胞浆RNA时使用。

**首次使用前，向每瓶 Wash Buffer 洗涤液（原液15ml）中加入 45ml无RNase 污染的分析纯无水乙醇，混匀，混合后总体积约60ml；使用后拧紧瓶盖。

产品使用：

1.     样本预处理

1)     抗凝全血：向离心管中先加入 3ml 淋巴细胞分离液，缓慢小心叠加 2–3ml 抗凝全血，1500 rpm 室温离心 15 min。吸取中间白膜层细胞转移至 1.5ml EP 管，加入 1ml 生理盐水，4000 rpm 离心 2 min，弃上清；加入100μl 生理盐水，充分振荡制备细胞悬液，确保无细胞团块（关键步骤）。

2)     组织块：将组织剪碎，放置于预冷平皿内的钢网上（平皿置于冰袋上），加入 DEPC 处理 PBS 或生理盐水（约 1ml/30 mg 组织），使用研磨棒研磨挤压组织使其透过钢网，收集过滤后的悬液，取 100μl 转移至 EP 管。（替代方案：液氮捣碎或者冰浴条件下匀浆处理）

3)     培养细胞（≤2×10⁶）：悬浮细胞或消化脱落的贴壁细胞经离心收集，保留细胞沉淀与适量上清，调整细胞浓度＜2×10⁷/ml，充分振荡至无细胞团块（关键步骤），吸取 100μl 悬液转移至 EP 管。

4)     培养细胞（＞2×10⁶）：待提取细胞数量＞2×10⁶且＜1×10⁷时，先离心收集细胞，弃尽全部上清，保留细胞沉淀，充分振荡至细胞完全松散（关键步骤）；加入 100μl Buffer CL 胞质裂解液，快速振荡混匀数秒后瞬时离心，吸取 100μl 上清转移至 1.5ml EP 管，随即开展提取操作。

5)     胞质 RNA 提取流程：取上述组织研磨液或各类细胞悬液，2000 rpm 离心 2 min，弃上清，充分振荡松散细胞沉淀；加入 Buffer CL 胞质裂解液（100μl/1×10⁷个细胞 或 30 mg 组织），充分振荡混匀 30 s，再次离心 30 s，吸取 100μl 上清转移至全新 EP 管。

6)     体液及液态样本：样本混匀后直接吸取100μl转移至1.5ml EP管进行提取；样本内需无红细胞或仅含少量红细胞，若红细胞较多，应先低速离心去除。如腹水、胸水、脑脊液、羊水等大容量液态样本，可先离心，保留底部细胞沉淀和约100μl上清，充分吹打混匀后吸取100μl转移至1.5ml EP管。

7)     细菌样本：取 1ml 新鲜培养菌液离心，保留菌体沉淀和约 100μl 上清，充分振荡重悬菌体，确保无聚集团块（关键步骤）。

8)     病毒样本：直接取血清、血浆等样本100μl，转移至1.5ml EP管中即可开展提取；若样本内红细胞含量较高，需先低速离心去除红细胞。

9)     植物组织：取鲜嫩植物组织（50 mg）置于液氮中充分研磨粉碎，待液氮挥发完全后加入1ml生理盐水混匀，吸取100μl转移至1.5ml EP管备用。

2.     向预处理完成的样本中加入 500μl Buffer LB 裂解结合液，充分颠倒混匀 5～10 次，直至裂解物澄清，室温静置 1 min。

3.     将全部样本裂解液转移至吸附柱内套管，12,000–14,000 rpm 室温离心 1 min（有条件可 4℃离心）。

4.     弃去收集管废液，向内套管中加入 500μl Wash Buffer 洗涤液，12,000–14,000 rpm 室温离心 1 min（有条件可 4℃离心）；重复洗涤操作一次。

5.     取出内套管，弃去收集管废液后重新套回内套管，不添加洗涤液，12,000–14,000 rpm 室温空管离心 1 min（有条件可 4℃离心），除去吸附膜上残留乙醇，避免乙醇干扰下游实验。

6.     将内套管转移至全新 1.5ml EP 管，向硅胶膜中央加入 25–50μl Elution Buffer 洗脱液（或 pH＞7.0 的 DEPC 处理水），室温静置 1 min，12,000–14,000 rpm 室温离心 1 min（有条件可 4℃离心），得到总 RNA。

注意事项：

1.     谨防环境 RNase 污染；实验操作全程佩戴手套，所有枪头、EP 管需经 DEPC 处理，移液枪保持洁净、无 RNase 污染。可在超净台（普通超净台或台式 PCR 专用超净台）内开展操作，有效降低 RNase 污染风险。

2.     1×10⁶～2×10⁶个细胞或3～5 mg组织，通常可提取得到10～30 μg RNA，足以开展多次RT-PCR实验；加大样本投入量易加剧基因组DNA污染。

3.     抗凝全血采集后建议 4 h 内完成 RNA 提取；血液冻存后会造成大量 RNA 损失，不建议用于提取。若无法及时提取，可先通过淋巴细胞分离液分离得到细胞（其他细胞、组织样本同理），置于 RNA 样品保存液（货号NBS2072）中保存。

4.     若向样本添加 Buffer LB 裂解结合液后出现白色絮状、丝状沉淀，原因为加液前细胞悬液未充分振荡混匀或上样细胞量过高，会降低 RNA 得率。

5.     样本裂解液转移至吸附柱离心 1 min 后，若柱内仍残留液体，提示样本过载或裂解不充分引发吸附膜堵塞。解决办法：①减少上样量；②添加 Buffer LB 后充分震荡裂解；③若样本无法舍弃，可用枪头轻轻划破吸附膜表层，再次离心 1 min。

6.     洗脱液尽量加至吸附膜中央；洗脱体积低于 25μl 时，难以充分浸润吸附膜，影响洗脱效果。

7.     洗脱液 pH＜7.0 会显著降低 RNA 洗脱效率，国内实验室纯水大多偏酸性，自行配制洗脱缓冲液时需要留意。本试剂盒配套洗脱液 pH 为 7.6。

8.     若产物总 RNA 存在明显基因组 DNA 污染，多为操作不当所致：如样本悬浮体积偏离标准（标准为 100μl），或 Buffer LB 添加量不足 500μl（推荐用量 500–600μl）。

9.     提取得到的总 RNA 可置于冰上或 4℃环境，立即开展 RT-PCR 等下游实验；如需保存，请放置于 - 80℃，并在数天内尽快使用。RNA 极易发生降解，不建议长期保存提取完成的 RNA。

10.   为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

→    产品咨询订购请点这里    ←

本产品仅用于生命科学研究，不得用于医学诊断及其他用途！