人牙髓间充质干细胞成骨诱导分化试剂盒

Human Dental Pulp Stem Cells Osteogenic Differentiation Kit

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产品简介：

本款人牙髓间充质干细胞成骨诱导分化培养基试剂盒，专门针对人牙髓间充质干细胞（DPSCs）进行配方优化，可高效诱导该细胞向成骨细胞方向分化。

为便于对诱导结果进行直观鉴定，本试剂盒配套提供茜素红染色液。茜素红是一种广泛应用于生物医学样本检验的示钙染剂，游离的钙离子不能与茜素红形成红色沉淀，而固化的钙质结节则能被染成红色。干细胞在诱导培养基作用下，会逐渐向骨细胞方向分化，产生明显的泌钙反应，形成钙盐结晶或钙质结节，均能被茜素红染色。

质检标准：

1.      pH：7.2~7.4

2.      内毒素含量：＜10EU/ml

3.      生物安全：细菌、真菌、支原体检测阴性

4.      质量检测：诱导测试合格

产品组成：

注：1. 本产品组分均为无菌分装，可直接配制成完全培养基使用；染色液为独立包装组分，请勿与培养基混用。

2. 配制完全培养基前，请瞬时离心各管小剂量试剂以免损失，配制后请在有效期内使用完毕。

3. 完全培养基储存条件：2~8℃，避光；配制后有效期：3个月。

产品使用：

1. 成骨诱导分化操作

1.1 明胶包被培养器皿

干细胞培养较长时间后，可能会出现脱壁卷边或漂浮现象，建议使用 0.1% Gelatin Solution 0.1%明胶溶液（NBS0234）对培养器皿进行包被。

准备合适的培养器皿，取适量明胶覆盖底面，37°C静置30 min，吸取晾干即可使用。

1.2 接种干细胞

取对数生长期的细胞，按照2.0×10⁴ cells/cm²的细胞密度接种至包被后的培养器皿中， 于 37℃，5% CO₂培养环境下培养至汇合度 60~70%，弃掉上清，加入成骨诱导分化培养基。

1.3 细胞分化诱导

于37℃，5% CO₂培养环境下培养约14~21天，每2~3天换液一次，并注意观察细胞形态变化。 根据细胞钙盐结晶析出和钙质结节形成的情况，决定终止细胞诱导的时间，并进行染色鉴定。

2. 染色鉴定

2.1 细胞固定

吸去培养基使用适量1×PBS清洗一次，弃去后取适量4%多聚甲醛溶液覆盖培养器皿底面，室温固定30~60 min，弃去固定液再使用1×PBS清洗两次。

2.2 茜素红染色

加入适量茜素红染色液染3~5 min，吸走茜素红染色液，用1×PBS清洗两次，并加入适量1× PBS避免细胞干燥。

2.3 诱导评估

显微镜下观察成骨染色效果，并进行图像采集和诱导评估。诱导成功时，钙质结节与茜素红染料结合后呈现红色或橘红色。

NOTE: 干细胞的成骨分化水平因细胞类型、细胞供体来源，培养条件、细胞代次、细胞状态和分化时间等因素而异。

注意事项：

 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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本产品仅用于生命科学研究，不得用于医学诊断及其他用途！

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