ACE 摇摇乐™大肠杆菌蛋白表达与纯化试剂盒

产品介绍：

大肠杆菌重组蛋白表达体系具有操作简单、成本低廉、周期短的优势，是生命科学实验室中最常用的重组蛋白表达体系。但这一体系并不完美，主要的问题在于：①外源蛋白在大肠杆菌体系中重组表达时，有很大概率形成包涵体；②某些重组蛋白表达量不高，难以纯化； ③部分重组蛋白表达过程中降解，一步亲和层析，难以去除降解带；④大肠杆菌诱导表达后，要进行裂菌操作，超声破碎裂菌受到设备的通量限制，不利于多样本并行纯化制备。

摇摇乐™试剂盒（ShaKit™）正是针对上述痛点而设计，通过整合四种核心组分——促进大肠杆菌胞内可溶表达的质粒载体、方便快速通量化裂菌的裂菌液、基于纳米抗体的高亲和力磁珠、高效解离目标蛋白的洗脱液——协同提升蛋白制备的成功率，同时缩短纯化周期并扩展操作通量。整个流程在菌体收集后，仅需裂菌液裂解、磁珠捕获目标蛋白、洗杂与洗脱等步骤，全程通过震荡孵育即可完成，无需超声或复杂设备，故名“摇摇乐™”。说明书附有详细操作步骤，建议用户在实验前完整阅读，以确保获得最佳使用效果。

产品优势：

1.      高纯度、高亲和力：搭配HA-tag纳米抗体高载磁珠，一步亲和纯化可达90%以上；

2.      简单/快速/高通量：纯化无需过柱，配套纯化磁珠。样本数量再多，一小时也能轻松搞定；

3.      蛋白可溶性提升：载体内置sumo标签，可显著提升蛋白可溶性表达，减少包涵体困扰。

组分介绍：

试剂盒包含四种必要组分，实验所需的其他常规通用缓冲液，需用户自备。本产品提供两种规格：10T和50T，每一个Test可纯化1mg左右的目的蛋白。

1.      pShakit载体(载体构建)：1. HA标签：与磁珠上的纳米抗体结合，捕获目的蛋白；2. Flag标签：用于目的蛋白WB等检测分析；3. Sumo标签：促进目的蛋白可溶性表达，被Ulpase识别，酶切洗脱目的蛋白；4. GFP荧光报告系统：阳性对照，可视化监测蛋白分布与流向。

2.      Anti-HA Magrose Beads (蛋白纯化磁珠)：1. 微球基质：30-100um磁性琼脂糖微球，磁珠法比填料法操作简便、快速；2. 配体：Anti-HA重组标签纳米抗体，抗体特异性高，可以得到高纯度目的蛋白；3. 标签蛋白结合载量：≥8mg/ml磁珠体积。

3.      铁锤超级裂菌液(大肠杆菌裂解)：1. 溶菌酶:可以在细菌细胞壁的不同位置高效切开裂口，实现胞内蛋白的完美释放；2. 核酸酶:高效降解宿主核酸片段，降低上清粘度；3. 温和裂解:酶法裂解，对比超声破碎法，操作简便、高效、温和。

4.      Ulpase(蛋白洗脱液)：1. 高活性sumo蛋白酶:精准切割、高效释放不含标签的目的蛋白；2. 温和洗脱：比传统高浓度咪唑、低pH等变性洗脱温和，保护目的蛋白天然构象、生物学活性；3. 操作简单：直接酶切+洗脱，对比传统过柱法，无需洗脱后再酶切标签。

pShakit载体图谱示意图：

pShakit载体特点/优势：

1.      N端融合了HA-Flag-Sumo标签，HA标签用于目的蛋白纯化，Flag标签用于目的蛋白鉴定，Sumo标签可以促进蛋白可溶性、并且可以被Ulpase特异性酶切去除，可以做到一步酶切+洗脱，释放目的蛋白。

2.      C端带有His标签、Strep 标签，可以通过是否引入终止密码子来决定是否保留C端标签。保留His或Strep 标签可用于后续二次亲和纯化，充分去除蛋白降解带，有效提升蛋白纯度。

3.      载体内置EGFP 荧光蛋白表达序列，可作为阳性对照质粒，验证重组蛋白表达与纯化全流程体系的有效性。通过观测菌体裂解液、流穿液及洗脱液的荧光信号，监测各步骤中目的蛋白的分布与流向。

4.      额外提供两款双酶切后的pShaKit载体： pShaKit-BamH Ⅰ/Xho Ⅰ（货号：BR0155）与pShaKit-BamH Ⅰ/Hind（货号：BR0156），可直接用于质粒构建。

摇摇乐™大肠杆菌蛋白表达与纯化试剂盒使用流程图：

性能展示：

结论：使用pShaKit载体表达的目的蛋白可实现高效可溶性表达。借助Anti-HA Magrose Beads一步亲和纯化，所得GFP荧光蛋白纯度可达90%以上。SDS-PAGE结果显示：原样中目的蛋白分子量约为50 kDa，流穿液中几乎无残留；经酶切洗脱后，蛋白分子量降至约26 kDa。以200mL培养基体系进行培养纯化，最终可获得总蛋白量≥8mg。

注意事项：

1.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅用于生命科学研究，不得用于医学诊断及其他用途！

订购信息：