NBGreen Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) 

NBGreen核酸凝胶染料 10,000×

产品简介：

NBGreen Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) 核酸凝胶染料（效果同SYBR Green I），是一种独特的油性大分子，不能穿透细胞膜进入细胞内，不易挥发升华，人体不会吸入。艾姆斯氏测试结果也表明NBGreen在凝胶染色浓度下完全没有诱变性，因此相对于EB的强致癌性是一种安全无毒的核酸染料。适用于各种大小 片段核酸的电泳染色，对核酸迁移率的影响远小于SYBR Green I。适用于使用微波或其它加热方法制备琼脂糖凝胶，室温下在酸或者碱性缓冲液中极其稳定，耐光性强。

NBGreen适用于琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳中的dsDNA、ssDNA以及RNA染色，可选择胶染法或泡染法进行染色，使用非常方便灵活。同SYBR Green I的光谱性质，能在可见光凝胶透射仪（蓝光透射仪）和蓝光切胶仪下直接观察，也适用于使用488nm激发的紫外凝胶成像透射仪。

保存条件: 

4℃避光干燥保存，2年有效。

产品使用：

一、 胶染法（同EB，电泳前染色）

1.      配制合适浓度的琼脂糖凝胶，微波炉加热至完全熔化。

2.      制胶时加入NBGreen核酸染料，使用终浓度为1×（每50mL琼脂糖溶液中加入5 μL NBGreen 10,000×水溶液，以此类推）。

3.      将含有NBGreen核酸染料的琼脂糖溶液倒入制胶器并插好梳子，室温下凝固30-60min。

4.      按照常规方法上样并电泳。

5.      蓝光扫描仪、蓝光切胶仪下直接观察，或者紫外下拍照观察。

【注意】

1)     此方法比较节省染料，500 μL染料大约可以做100块50mL的胶。

2)     由于NBGreen具有良好的热稳定性，可以直接添加到热的琼脂糖溶液中而不需要等待溶液冷却。摇晃，振荡或者翻转以保证染料充分混匀。

3)     NBGreen兼容所有常用的电泳缓冲溶液。

4)     如果总是看到条带弥散或分离不理想，建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。如果染色后问题依旧存在，则说明问题与染料无关，请尝试：降低琼脂糖浓度；选用更长的凝胶；延长凝胶时间以保证边缘清晰；改进上样技巧或选择泡染法染色。

5)     胶染法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶，对于聚丙烯酰胺凝胶请使用泡染法。

二、泡染法（电泳后染色）

1.      配制合适浓度的琼脂糖凝胶，微波炉加热至完全熔化。

2.      将琼脂糖溶液倒入制胶器并插好梳子，室温下凝固约30-60min。

3.      按照常规方法进行电泳。

4.      用H₂O将NBGreen 10,000×水溶液稀释约3,300倍到0.1M NaCl中，制成3×染色液。（如将15 μL NBGreen 10,000×水溶液和5mL 1M NaCl加到45mL H₂O中）。

5.      将凝胶小心地放入合适的容器中，缓慢加入足量的3×染色液浸没凝胶。室温振荡染色30min左右，最佳染色时间根据 凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含3.5～10%聚丙烯酰胺的凝胶，染色时间通常介于30min到1h，并随聚丙烯酰胺含量增加而延长。

6.      蓝光扫描仪、蓝光切胶仪下直接观察，或者紫外下拍照观察。

【注意】

1)     用泡染法染色时，染料用量较多。单次使用的染色液可重复使用3次左右。

2)     3×NBGreen染色液可以大量制备，在室温下避光保存直至用完。

3)     Marker上样量为5 μL，若为宽胶孔，需适当增加上样量；

4)     建议使用0.7-1.2% Agarose，电压4-10V/cm，1×TAE缓冲液电泳。

注意事项：

1.      关于核酸染料相关产品的选择：如果您使用紫外成像仪，建议选择NBRed核酸染料（货号：NBS7021），是EB的无毒替代品，具有同EB相同的光谱特性；如果您使用可见光透射仪或希望在可见光（蓝光）下观测，请选择NBGreen核酸染料（货号：NBS7022），在凝胶染色中是SYBR Green I的完美替代品，安全无毒。。

2.      NBGreen虽然具SYBR Green I相似的光谱特性，且在凝胶染色方面效果优于SYBR Green I，但不建议用于qPCR。。

3.      少数情况下，质粒经某些酶切后的DNA样品会出现拖尾和分辨率降低的问题，此时建议同时尝试两种染色方法以决定哪种方法更适合。

4.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

应用示例：

NBGreen染色结果：M1-M4是不同上样量的1kb DNA Ladder（依次未M1：未稀释，M2：稀释40倍，M3：稀释400倍，M4：未稀释）。电泳条件：138 V，38 min；1%琼脂糖胶。

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