内质网绿色荧光探针（活细胞成像用）

ER-Tracker Green (BODIPY FL Glibenclamide),for live-cell imaging

产品简介：

ER-Tracker探针是一系列具有细胞膜透过性，对活细胞内质网具有高度选择性的探针，不像传统的DiOC6(3)，该系列探针几乎不对线粒体着色，且在较低浓度即可实现对内质网的染色，且对细胞几乎无毒性。使用以下提供的优化步骤对活细胞染色后用醛固定，可以部分保留活细胞的染色特征。

本品为ER-Tracker Green (BODIPY FL Glibenclamide)，由绿色荧光染料BODIPY FL和 Glibenclamide 偶联而成，其Ex= 504 nm，Em= 511nm。格列本脲（Glibenclamide, glyburide），一种常用降血糖药物，在胰岛β细胞、胰岛素的分泌、心肌衰竭细胞功能以及心律不齐的研究等方面具有重要科研用途。格列本脲高度结合ATP-敏感型K+通道的磺脲受体，且本受体富集存在内质网上，因此适合用作内质网荧光探针。

本品为溶于DMSO的1 mM 浓度ER-Tracker Green (BODIPY FL Glibenclamide)储存液，推荐工作浓度为～1 μM。我司还提供了ER-Tracker Green 稀释液，使ER-Tracker Green的使用更加便捷。按照1:1000的比例稀释，每10µl可以配制10ml ER-Tracker Green工作液；按照1:3000的比例稀释，每10µl可以配制30ml ER-Tracker Green工作液。

保存条件: 

-20℃避光干燥保存，至少六个月有效，避免反复冻融。

基本特性：

1)     分子式（Formula）：C37H42BClF2N6O6S

2)     分子量（Molecular Weight）：783.1

3)     Ex/Em：504/511 nm 

4)     滤片（Filter）：FITC

5)     外观（Appearance）：液体

6)     溶解性：溶于DMSO（1mM）

7)     纯度：1mM

8)     化学结构图：

产品组成：

产品使用：（以下步骤仅做参考，具体请根据实际情况或参考文献资料来调整）

使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。最佳工作浓度需根据不同的实验要求、细胞类型、细胞或组织的膜通透性等进行优化。

1、ER-Tracker Green工作液的配制：
(1) 取少量ER-Tracker Green按照1:1000的比例加入到ER-Tracker Green 稀释液中。例如取1μl ER-Tracker Green加入到1ml ER-Tracker Green 稀释液中。混匀后即为ER-Tracker Green工作液。
(2) ER-Tracker Green工作液使用前需37℃预温育。
[注]：工作液中ER-Tracker Green的浓度可以根据实际情况进行适当调整，推荐的稀释比例调整范围为1:1000-1:3000。为降低背景，在染色效果可以接受的范围内，建议尽量使用较低浓度的ER-Tracker Green。

2、内质网的荧光标记：
(1) 去除细胞培养液，用适量的溶液如Hanks平衡盐溶液（HBSS），含碳酸氢钠，钙、镁离子，酚红（CAT# NBS4200）洗涤生长在盖玻片上的细胞。

(2) 去除洗涤液，加入步骤1配制好的并37℃预温育的ER-Tracker Green染色工作液，与细胞37℃共孵育15-30分钟。
(3).去除ER-Tracker Green染色工作液，用细胞培养液洗涤细胞1-2次。
(4).随后通常用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜进行观察。此时可观察到内质网呈明亮的强荧光染色。
(5).如果经ER-Tracker Green染色后的细胞需要进行固定，可以使用4%甲醛37℃固定2分钟。固定后用适当的洗涤液洗涤2-3次，每次5分钟，随后可以进行复染或滴加适当的抗荧光淬灭封片液，最后封片观察。

[注]：ER-Tracker Green染色的细胞不能用Triton X-100通透，Triton X-100通透处理会导致ER-Tracker Green的荧光染色消失。

注意事项：

1.      荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

2.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅用于生命科学研究，不得用于医学诊断及其他用途！

常见问题及解答FAQ：

Q: 请问HBSS 里面的钙镁离子在里面起到什么作用？

A: 有利于维持细胞状态，利于后续的染色。

Q: 请问固定后的死细胞还能染上吗？

A: 该探针主要染的是活细胞的内质网，固定样本基本染不上色。

Q: 染色之后可以加抗荧光淬灭剂防止荧光淬灭吗？

A: 活细胞的染色，不需要加抗荧光淬灭封片液。

Q: 固定后的荧光还会淬灭么？或者说可以维持多长时间？

A: ER-Tracker Green 按照后附的使用说明染色后，用甲醛等固定后染色效果可以被部分保留， 荧光均会有淬灭的现象的。具体的荧光维持时间这边没有具体数据可参考。

Q: 请问 mito-tracker green 和 ER-traker red 是同时染还是分开依次染，染完后荧光可持续多久（也就是在多长时间内还可以检测）？

A: 建议分开依次染色，荧光均存在淬灭的现象，染色完建议尽快在1-2h内完成检测。

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