Exonuclease I 核酸外切酶 I

产品简介：

Exonuclease l (E.coli) 是单链特异性核酸外切酶，沿 3'-5' 方向降解单链 DNA，释放 5'-脱氧核糖核苷酸。Exo I 对单链有很强的特异性，不会降解双链 DNA 和 RNA。此外，也无法降解由磷酰基团或乙酰基团封闭了 3'-OH 末端的 DNA 单链。本产品是把 Exo I 基因 (E.coli) 在大肠杆菌中进行重组表达后，经多次纯化分离而得到的。

产品组成：

保存条件: 

-20℃保存，2年有效。

产品应用：

1. 从 PCR产物中去除引物和寡核苷酸：Exo I可去除PCR反应中 未用完的引物以及扩增产生的多余的单链DNA。

2. 去除核酸混合物中的ssDNA：Exo I可特异性地消化反应液中的 ssDNA，而不会消化dsDNA和RNA。 3. ssDNA 检测：Exo I可用于检测存在游离3'羟基的ssDNA。

活性定义:

1 活性单位(U)是指以单链DNA为底物 ，37℃、1× Exo I缓冲液 条件下，30 min内释放10 nmol酸溶性核苷酸所需的酶量。

蛋白纯度检测:

经SDS-PAGE凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于95%。

非特异性内切酶活性：

37℃下，在20 μl反应体系中将100 U Exonuclease I 与 200 ng 超螺旋质粒DNA共同温育4 h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于 20%的质粒DNA转变成缺刻或线性状态。

DNase 活性：

37℃下，在20 μl反应体系中将100 U Exonuclease I与 15 ng 双链DNA片段共同温育16 h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，双链DNA 片段无变化。

RNase活性：

37℃下，在10 μl反应体系中将100 U Exonuclease I与 500 ng RNA共同温育1 h，使用琼脂糖凝胶电泳检测，超过90%的RNA保持完整。

宿主DNA残留：

采用中国药典 2020 版四部通则 3407 外源性 DNA 残留量测定法第三法定量PCR 法，本品中大肠杆菌宿主细胞DNA 残留量低于1 拷贝/20 U。

使用方法：

1. 推荐的反应体系：

（1）PCR反应产物中去除引物或其他单链残留：

注：配合虾碱性磷酸酶（SAP）用来去除残存的单核苷酸（dNTPs），之后不需要对 PCR 产物进行纯化，即可以进行测序反应。

（2）单链DNA去除

a：DNA mixture 中的单链DNA不超过1 μg。

2. 推荐的反应条件：

37℃温育15~30 min。

3. 失活：

80℃温育20 min。

注意事项：

1.      Exo I 可兼容绝大多数PCR体系，可直接在PCR产物中添加。 纯化后的PCR产物可直接用于测序，但不推荐直接用于克隆。

2.      Exo I 用于单独去除ssDNA的实验，推荐搭配10× Exo I Buffer 使用。

3.      Exo I 不能切割双链DNA，因此含有二级结构的单链DNA需要变性后才能完全消化。

4.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。