重组Taq DNA 聚合酶

Taq DNA Polymerase

产品简介：

  Taq DNA Polymerase为来源于嗜热菌Thermus aquaticus，经大肠杆菌重组表达纯化获得的耐热性DNA聚合酶，分子量为 94 kDa，与天然Taq DNA 聚合酶具有相同的功能。该酶具有 5'→ 3' 聚合酶活性和 5'→3' 外切酶活性，但无3'→ 5'外切酶活性。PCR 产物的3' 端带有突出的 A 碱基，可克隆至 T 载体。

产品组成：

保存条件: 

-20℃保存，2年有效。

活性定义:

1个活性单位(U) 定义为74℃下，30 min内催化10 nmol dNTP 掺入酸不溶物所需的酶量。

蛋白纯度检测：

使用SDS-PAGE凝胶电泳检测，蛋白纯度不低于95%。

核酸内切酶活性检测：

将5 U Taq DNA Polymerase与200 ng超螺旋质粒DNA在 37℃下，共同温育4 h后，使用琼脂糖凝胶电泳检测，少于10%的质粒DNA转变成缺刻或线性状态。

非特异性核酸酶活性检测：

将5 U Taq DNA Polymerase与15 ng双链DNA片段在37℃ 温育16 h，使用琼脂糖凝胶电泳检测双链DNA底物无变化。

宿主DNA残留检测：

使用大肠杆菌16S rDNA特异性引物探针组，采用荧光定量PCR 法检测5 U Taq DNA Polymerase，大肠杆菌宿主基因组DNA残留低于1 copy。

使用方法：

1. 建议的PCR反应体系

a.引物推荐终浓度为0.2 μM，效果不佳时可以在0.1~1 μM进行调整；引物长度请设定18~25 bp，GC含量为40%~60%。

b.不同模板最佳反应浓度有所不同，以50 μl体系为例：模板为基因组DNA时，一般使用量应在10~400 ng；当模板为质粒或病毒DNA时，一般使用量应在10 pg~20 ng。

2. 常规PCR反应程序

步骤	温度	时间
预变性a	94℃	3~5 min
变性	94℃	30 s
退火	55~65℃	30 s		30~35 Cycles
延伸	72℃	30~60 s/kb
终延伸	72℃	5 min

a. 该预变性条件适合绝大多数扩增反应，对于一些复杂模板，例如：菌液、菌落（尤其是酵母）的PCR 扩增，预变性时间可适当延长至10 min，以提高预变性效果。

注: 如果使用酵母菌液作为PCR 扩增模板，建议目的片段长度不超过2.5 kb； 若超出2.5 kb,建议将酵母菌液预先进行破壁处理。

注意事项：

1.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。