Nt.BbvCI

产品简介：

Nt.BbvCI 是一种切刻内切酶，仅切割 dsDNA 底物的一条链；在 dsDNA 底物上产生切口，而不切开 dsDNA。Nt.BbvCI常用于核酸等温扩增（如SDA、RCA），由Nt.BbvCI产生DNA缺口，触发聚合酶的链置换反应，重复切割、置换、延伸过程从而实现核酸指数扩增。

识别位点：

CCTCAGC
5'...C C↓T C A G C...3'
3'...G G A G T C G...5'

产品组成：

保存条件: 

-20℃保存，2年有效。

建议反应条件：

1× FastCut Buffer；
37℃温育；
参照“DNA 酶切流程”配制反应体系。

失活条件：

80℃温育20 min。

甲基化敏感性：

对于被 EcoBI 甲基化的 DNA，剪切可能受阻。

活性定义:

1活性单位(U)是指在50 μl反应体系中，37℃ 1 h内可以完全将 1 µg的超螺旋p615 DNA转化成开环形式所需的酶量。

超长时间温育检测：

将5 U Nt.BbvCI与超螺旋 p615 DNA 底物在37℃温育16 h，通过琼脂糖凝胶电泳检测开环 DNA 无变化。

功能活性检测：

37℃下，在20 μl通用FastCut 反应体系中，5 U Nt.BbvCI能够 在15 min内将1 μg p615转化成开环形式。

使用方法：

1. DNA酶切流程

① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

a. DNA 底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响Nt.BbvCI酶活性；

② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

③ 37℃温育15 min~3 h；

④ 80℃温育20 min即可使酶失活，停止反应，或者通过吸附柱或苯酚/氯仿纯化终止反应。

不同DNA中的酶切位点数量

甲基化修饰影响

在不同反应缓冲液中的活性

注：活性数据来自限制酶标准反应体系下的检测。

注意事项：

1.      反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的10%，避免酶中过多的甘油引起星号活性；

2.      限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂(例如甘油、盐)与底物溶液中的污染物(例如盐、EDTA或乙醇等)相同，反应体积越小，酶切反应抑制效应越强。

3.      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

本产品仅用于生命科学研究，不得用于医学诊断及其他用途！

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