磁珠法总RNA提取试剂盒（预分装）

产品介绍 

磁珠法总RNA提取试剂盒，为客户提供一套从动物组织、植物组织、培养细胞、细菌中纯化完整、高质量的总RNA。试剂盒采用独特的缓冲液系统， 快速裂解细胞，沉淀蛋白，再经过醇介导将核酸分子结合于纳米磁珠表面，再经DNA酶I处理去除基因组DNA，最终得到纯度高，完整性好的总 RNA。可用于RT-PCR、Real-Time PCR、芯片分析、Northern杂交等多种下游实验。

注意事项

1 使用前检查各组分是否出现沉淀。若有，请轻轻摇晃混合均匀，或37℃水浴重新溶解。

2 β-巯基乙醇请4℃保存，使用前在RNA裂解液中加入560μl β-巯基乙醇至终浓度为4%，加入β-巯基乙醇的RNA裂解液于4℃保存，有效期6 个月。

3 戴一次性干净手套和口罩操作，防止皮肤、唾液和实验室用品上存在的RNase污染。

4 使用无菌无RNase的塑料制品和枪头。

5 若使用玻璃器皿须经过0.1% DEPC水在37℃下浸泡12小时，然后经过 121℃高压灭菌30分钟，烘干后使用。

6 配制相关的试剂必须使用经过121℃高压灭菌的0.1% DEPC水。

使用流程

样本预处理

1 组织样品 取10-20mg动物组织，置于液氮中迅速研磨成粉末，立即加入200μl RNA裂解液（已加入β-巯基乙醇），也可将组织置于离心管中，迅速加入 200μl RNA裂解液（已加入β-巯基乙醇），用普通玻璃匀浆器或者电动匀浆器将组织彻底研磨均匀。 

2 细胞样品 收集2-5×106个细胞。 对于贴壁细胞，吸弃培养液，加入200μl RNA裂解液（已加入β-巯基乙醇）。用枪头反复吹打混匀直至细胞团消化不见为止，转移到干净的离心 管内。 对于悬浮细胞：5000rpm（~3056×g）离心5min，吸弃培养液，收集细胞，每2-5×106个细胞加入200μl RNA裂解液（已加入β-巯基乙醇）。 用枪头反复吹打混匀直至看不到细胞团为止。 

3 植物组织样品 将液氮研磨好的植物粉末立即转移到 RNA裂解液(已加入β-巯基乙醇)中，按照每10-20mg加入200μl RNA裂解液（已加入β-巯基乙醇）， 用移液器吹打均匀至无明显的粉末团。

4 细菌样品 用100μl新鲜配制的含溶菌酶的TE缓冲液重悬细菌沉淀。革兰氏阳性细菌可使用3mg/ml(终浓度)的溶菌酶，轻轻混匀，室温孵育 5-10min，加入200μl RNA裂解液（已加入β-巯基乙醇），用枪头吹打混匀；革兰氏阴性细菌则采用0.4mg/ml(终浓度)的溶菌酶，轻轻敲打 混匀，室温孵育3-5min。加入200μl RNA裂解液（已加入β-巯基乙醇），用枪头吹打混匀。

自动化法提取-MagET™ Smart 16

1 向处理好的样品匀浆液中加入400μl RNA中和液，混匀。室温放置3-5min。如果动物组织样品来源比较珍贵，可以选择裂解物加入 RNA中和液后置于70℃加热5min，提高RNA得率。 

2 室温，12,000rpm（~13,400×g）离心1min，小心吸取上清液到新的1.5ml无核酸酶的EP管中。 

3 取出MagET™ 总RNA预分装试剂板，颠倒混匀数次使磁珠重悬，轻甩MagET™ 总RNA预分装试剂板使试剂及磁珠集中到孔板底部。

注:使用前小心撕去铝箔封口膜，避免MagET™ 总RNA预分装试剂板剧烈振动，防止液体溅出。 

4 按如下比例配制DNase I反应混合液，并轻轻混匀。

5 将50μl DNase I反应混合液加入到MagET™ 总RNA预分装试剂板的的第3, 9列内。 

6 在MagET™ 总RNA预分装试剂板的第2, 8列中加入全部上清液，将MagET™ 总RNA预分装试剂板置于MagET™ Smart 16 的底座上。

注 ：请在加样后半小时内上机运行程序。 

7 将MagET™ 8孔磁棒套插入MagET™ Smart 16的磁棒套架卡槽内。 

8 选择程序并运行，自动化程序结束后，取下MagET™8孔磁棒套丢弃，拿出MagET™ 总RNA预分装试剂板，使用移液器取出第6,12列 样品于新的离心管中，即得总RNA产物。如不能及时进行下游试验，总RNA样本可短期保存于-80℃。

表1.MagETTM Smart 16 程序设定